本文關(guān)鍵詞：H9亞型禽流感病毒和禽肺病毒二重RT-PCR檢測(cè)方法的建立

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【摘要】：根據(jù)GenBank中H9亞型禽流感病毒HA基因和禽肺病毒F基因的保守序列,通過(guò)Blast進(jìn)行比對(duì),在各自保守的基因序列中分別設(shè)計(jì)了兩對(duì)特異性擴(kuò)增引物,引物擴(kuò)增的片段大小分別為569bp和424bp,應(yīng)用這兩對(duì)引物建立了H9亞型禽流感病毒和禽肺病毒的二重RT-PCR檢測(cè)方法,對(duì)建立的方法進(jìn)行了特異性試驗(yàn)、敏感性試驗(yàn)和臨床樣品驗(yàn)證。對(duì)檢測(cè)為陽(yáng)性的樣品進(jìn)行克隆和序列分析,以驗(yàn)證本方法的準(zhǔn)確性。特異性試驗(yàn)結(jié)果表明,所有參試的H9亞型禽流感病毒都能擴(kuò)增出大小為569bp的片段,參試的禽肺病毒毒株擴(kuò)增出424bp的片段,沒(méi)有其他條帶出現(xiàn),而對(duì)照的參試毒株在569bp和424bp處沒(méi)有任何條帶;敏感性試驗(yàn)結(jié)果表明,本試驗(yàn)建立的方法能檢測(cè)到10pg的H9亞型禽流感病毒和禽肺病毒RNA模板。應(yīng)用本試驗(yàn)建立的方法對(duì)廣西采集的病雞樣品132份進(jìn)行檢測(cè),H9亞型禽流感病毒陽(yáng)性的樣品有6份,禽肺病毒陽(yáng)性的樣品2份;隨機(jī)各挑取2份H9亞型禽流感病毒和禽肺病毒陽(yáng)性PCR產(chǎn)物進(jìn)行克隆和序列分析,經(jīng)比對(duì)分析,2份H9亞型禽流感病毒陽(yáng)性PCR產(chǎn)物與H9亞型禽流感病毒(No.JF715045.1)100%同源,2份禽肺病毒陽(yáng)性PCR產(chǎn)物與禽肺病毒株(No.AF187154)100%同源。本試驗(yàn)建立的H9亞型禽流感病毒和禽肺病毒二重RT-PCR檢測(cè)方法具有特異、敏感、快速的特點(diǎn),可以用于臨床快速準(zhǔn)確檢測(cè)H9亞型禽流感病毒和禽肺病毒。
【作者單位】： 廣西壯族自治區(qū)獸醫(yī)研究所廣西動(dòng)物疫病病原生物學(xué)與診斷重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： H亞型禽流感病毒 禽肺病毒 二重反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng) 檢測(cè)
【基金】：廣西科技廳專(zhuān)項(xiàng)(桂科AD16380009,桂科合14123001-8,桂科重14121003-4-2,桂科專(zhuān)項(xiàng)16-1) 廣西自然科學(xué)基金項(xiàng)目(2013GXNSFDA019015) 國(guó)家萬(wàn)人計(jì)劃領(lǐng)軍人才專(zhuān)項(xiàng)(2016-37)
【分類(lèi)號(hào)】：S852.65
【正文快照】： H9亞型禽流感病毒(Avian influenza virus H9subtype,AIV H9)和禽肺病毒(Avian pneumovir-us,APV)是危害養(yǎng)雞業(yè)的兩種重要病毒,H9亞型禽流感病毒屬正黏病毒科A型流感病毒屬,病毒基因組為分節(jié)段的單股負(fù)鏈RNA,包含HA、NA、M、PB1、PB2、NP、PA、NS 8個(gè)基因組[1]。禽肺病毒屬于

【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：750100