發(fā)布時(shí)間：2017-08-27 13:18

  本文關(guān)鍵詞：小鵝瘟病毒快速檢測(cè)試紙條的研制及其應(yīng)用

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【摘要】：小鵝瘟(Gosling Plague, GP)是由鵝細(xì)小病毒(Goose Parvovirus, GPV)弓起的雛鵝或雛番鴨的一種傳播快、死亡率高、高度接觸性急性或亞急性敗血性傳染��；主要侵害4-20日齡雛鵝和雛番鴨;以腸道栓塞為其特征性病變,是嚴(yán)重危害養(yǎng)鵝業(yè)發(fā)展的重要傳染病之一瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)是檢測(cè)GPV的傳統(tǒng)方法,此方法操作簡(jiǎn)單、方便、快速且經(jīng)濟(jì),適宜在基層推廣和應(yīng)用,但是靈敏度較低,對(duì)抗原抗體的要求比較高。近年來(lái)隨著分子生物學(xué)技術(shù)的迅速發(fā)展,小鵝瘟的診斷技術(shù)也隨之取得了一些進(jìn)展,建立的方法主要包括聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)和核酸探針技術(shù)。這些方法具有敏感性高、特異好等優(yōu)點(diǎn),但是也存在著一些局限性,例如需要特殊的儀器,高昂的經(jīng)濟(jì)代價(jià)等。本研究擬建立一種簡(jiǎn)單、方便、直觀快速的膠體金檢測(cè)方法來(lái)解決生產(chǎn)實(shí)踐中所遇到的臨床檢測(cè)GPV的技術(shù)問(wèn)題。1.膠體金的制備及粒徑的選擇本部分研究通過(guò)檸檬酸三鈉還原氯金酸的方法分別制備了粒徑分別為15nm、30nm和40nm的膠體金,并且分別摸索出其標(biāo)記的最佳pH為7.44、7.61、8.66,最佳蛋白量為7.7μg/mL、8.8μg/mL、8.8μg/mL,成功制備了膠體金-抗體復(fù)合物。通過(guò)目測(cè)比較,透射電鏡鑒定,最終篩選出pH7.61最佳蛋白量8.8μg/mL 30nm的膠體金為最佳粒徑并應(yīng)用于本研究試紙條的制備。2.膠體金試紙條性能的研究通過(guò)對(duì)膠體金試紙條的膠體金-抗體復(fù)合物的最佳噴量、金標(biāo)墊的處理、NC膜T線和C線處理、封閉液的選擇等工藝指標(biāo)進(jìn)行摸索并優(yōu)化。最終確定最佳噴量1：1稀釋,30μL/cm、用含0.1%Tween-20,0.3%BSA,4%蔗糖的PB溶液處理玻璃纖維素膜、NC膜T線C線2.0mg/mL的抗體,0.7μL/cm、封閉液為1%BSA封閉兩個(gè)小時(shí)。特異性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示本研究制備的試紙條只與GPV反應(yīng),而與常見(jiàn)家禽H9亞型禽流感病毒(AIV-H9)、馬立克氏病病毒(MDV)、新城疫病毒(NDV)和雞貧血病病毒(CAV)等沒(méi)有交叉反應(yīng),具有良好的特異性：試紙條的檢測(cè)靈敏度用小鵝瘟病毒尿囊液完成。用病毒滴度為3.3x104.1LD50/ml的尿囊液作為檢測(cè)原時(shí),本試紙條可以檢測(cè)到約80個(gè)LD50;試紙條批內(nèi)、批間重復(fù)性良好,同時(shí)將其抽真空并置于4℃保存六個(gè)月時(shí),其靈敏度、特異性等性能無(wú)明顯變化。3.試紙條的臨床應(yīng)用收集臨床疑似發(fā)病的雛鵝,天鵝,櫻桃谷鴨的病料,初步應(yīng)用本研究制備的試紙條進(jìn)行GPV抗原檢測(cè),并與病毒分離的方法進(jìn)行同步對(duì)比實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,該試紙條與病毒分離的符合率為87.9%。
【關(guān)鍵詞】：小鵝瘟病毒 快速檢測(cè) 膠體金試紙條
【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S852.65
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-8
• 符號(hào)說(shuō)明8-10
• 文獻(xiàn)綜述10-23
• 第一章 小鵝瘟流行現(xiàn)狀及檢測(cè)方法研究進(jìn)展10-17
• 第二章 膠體金免疫層析檢測(cè)技術(shù)研究進(jìn)展17-23
• 研究?jī)?nèi)容一、膠體金的制備及最佳粒徑的選擇23-32
• 1 材料23-24
• 2 方法24-26
• 3 結(jié)果26-30
• 4 討論30-32
• 研究?jī)?nèi)容二、小鵝瘟抗原快速檢測(cè)試紙條的制備及其性能的研究32-44
• 1 材料32-33
• 2 方法33-35
• 3 結(jié)果35-42
• 4 討論42-44
• 研究?jī)?nèi)容三、小鵝瘟抗原檢測(cè)試紙條的臨床應(yīng)用44-47
• 1 材料44
• 2 方法44-45
• 3 結(jié)果45-46
• 4 討論46-47
• 全文總結(jié)47-48
• 參考文獻(xiàn)48-55
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文55-56
• 致謝56-57

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 涂飛;宋娜;石亞運(yùn);呂亞楠;邵紅霞;錢琨;金文杰;秦愛(ài)建;;1株鵝細(xì)小病毒強(qiáng)毒株的分離與鑒定[J];河南農(nóng)業(yè)科學(xué);2014年12期

2 金文杰;呂亞楠;王芳;朱良全;秦愛(ài)建;丁家波;;我國(guó)小鵝瘟研究進(jìn)展及成就[J];微生物學(xué)通報(bào);2014年03期

3 郭卉;涂飛;呂亞楠;史榮華;金文杰;邵紅霞;錢琨;秦愛(ài)建;;抗鵝細(xì)小病毒單克隆抗體的制備及其免疫熒光檢測(cè)方法的建立[J];中國(guó)動(dòng)物傳染病學(xué)報(bào);2013年04期

4 龔云飛;陳宗倫;奚茜;李沐潔;王唯芬;王e，

本文編號(hào)：745637