本文關(guān)鍵詞：硝酸鹽對湖羊瘤胃硝態(tài)氮消失率、發(fā)酵特性及微生物區(qū)系的影響

  更多相關(guān)文章： 體外產(chǎn)氣 微生物區(qū)系 硝酸鹽還原菌 原蟲

【摘要】：試驗一旨在研究日糧硝酸鹽水平對湖羊瘤胃硝態(tài)氮動態(tài)消失率和發(fā)酵特性的影響。選取6頭9月齡,體況良好,體重相近(30±5)kg且裝有永久性瘺管的湖羊,采用隨機區(qū)組設(shè)計,試驗分為6期,每期14 d,采樣期2 d,每期日糧(DM基礎(chǔ))添加硝酸鉀的劑量分別為：對照組0%、1%、2%、3%、4%、5%,測定喂前及喂后0.5、1、1.5、2、4、6、8h瘤胃液硝酸鹽和亞硝酸鹽含量及瘤胃發(fā)酵參數(shù)。晨飼后2h通過頸靜脈采血,測定高鐵血紅蛋白含量。第一期結(jié)束后采集瘤胃液進行體外培養(yǎng),并使用ANKOM RFS產(chǎn)氣測量系統(tǒng)測定凈產(chǎn)氣量。結(jié)果表明：高鐵血紅蛋白的含量隨硝酸鹽添加量的增加而顯著升高(P0.01),最高達0.32%。湖羊在采食1h后瘤胃液硝酸鹽含量達到最高(0.95～2.14g/L),亞硝酸鹽含量在喂后1.5 h達到最高(0.93～6.22 μmol/L)o添加硝酸鹽顯著提高瘤胃液pH值(P0.01)和喂后2h的氨態(tài)氮含量(P0.01)以及乙酸／丙酸的比例,添加量高于3%會降低微生物蛋白和總揮發(fā)性脂肪酸的含量,硝酸鹽添加量為2%時微生物蛋白和總揮發(fā)性脂肪酸的合成量最高,最有利于微生物發(fā)酵。體外產(chǎn)氣試驗結(jié)果表明,各組產(chǎn)氣速率無顯著差異,5%組凈產(chǎn)氣量有下降趨勢(P0.1)。試驗二旨在研究日糧硝酸鹽水平對瘤胃細菌群落的影響。采樣期飼喂前采集瘤胃液,提取總DNA,利用Illumina Miseq平臺對16S V4區(qū)測序及Real-time PCR分析。結(jié)果表明,湖羊瘤胃中Bacteroidetes、Firmicutes、Proteobacteria、Fibrobacteres、Verrucomicrobia的總和占細菌群落總數(shù)的90%以上,為瘤胃中的優(yōu)勢菌門。屬水平上各組中均以Prevotella、 Selenomonas、Succinivibrio為優(yōu)勢菌屬,平均比例分別為47.87%、5.76%、2.37%。各組間Shanon指數(shù)無顯著差異。Chao1指數(shù)隨硝酸鹽添加量的增加而升高,5%組顯著高于對照組(P0.05)。添加硝酸鹽能夠提高湖羊瘤胃細菌的豐度,但不會改變瘤胃細菌的多樣性和菌群結(jié)構(gòu)。Real-time PCR結(jié)果顯示,Campylobacter fetus的相對倍數(shù)隨硝酸鹽的添加量的增加而增高,5%組相對倍數(shù)最高,差異極顯著(P0.01)。試驗三旨在研究日糧中硝酸鹽水平對湖羊瘤胃真菌和原蟲區(qū)系的影響。采樣期飼喂前采集瘤胃液,提取總DNA,擴增18S V4區(qū),利用Illumina Miseq測序平臺進行測序并對結(jié)果進行生物信息學(xué)分析。結(jié)果表明,日糧中添加硝酸鹽對Shannon指數(shù)和Chao1指數(shù)無顯著影響,不會改變湖羊瘤胃真菌、原蟲的多樣性。湖羊瘤胃優(yōu)勢真菌為Saccharomyces、 Malassezia、Phaeosphaeria、Davidiella、Issatchenkia,對照組的Saccharomyces相對豐度顯著高于2%、3%、5%組,其他各處理組的真菌屬無顯著差異；原蟲屬中,2%組的Unculture屬相對豐度極顯著高于其他處理組(P0.01)。結(jié)果顯示,日糧添加硝酸鹽抑制真菌Saccharomyces的生長,2%DM的劑量能夠顯著提高原蟲區(qū)系中Unculture的相對豐度。結(jié)論：湖羊日糧中添加2%的硝酸鹽最有利于瘤胃發(fā)酵,硝酸鹽的劑量不會改變湖羊瘤胃中的優(yōu)勢細菌數(shù)量,但能提高硝酸鹽還原菌Campylobacter fetus的相對倍數(shù)。硝酸鹽能抑制真菌Saccharomyces的生長。2%DM的劑量能夠顯著提高原蟲區(qū)系中Unculture的相對豐度。
【關(guān)鍵詞】：體外產(chǎn)氣 微生物區(qū)系 硝酸鹽還原菌 原蟲
【學(xué)位授予單位】：揚州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S826
【目錄】：

• 摘要2-4
• Abstract4-10
• 符號說明10-11
• 第一章 文獻綜述11-23
• 1. 日糧中氮的代謝11-12
• 2. 硝酸鹽的代謝12-19
• 2.1 硝酸鹽的代謝途徑12-14
• 2.2 硝酸鹽的毒性14-15
• 2.3 影響硝酸鹽還原的因素15-19
• 2.3.1 供氫體15
• 2.3.2 瘤胃細菌15-16
• 2.3.3 瘤胃真菌16-17
• 2.3.4 瘤胃原蟲17-18
• 2.3.5 轉(zhuǎn)運蛋白18
• 2.3.6 其它因素18-19
• 3. 對動物的影響19-20
• 3.1 對動物生產(chǎn)性能的影響19
• 3.2 對瘤胃CH_4產(chǎn)量的影響19-20
• 4. 瘤胃微生物研究技術(shù)20-22
• 4.1 實時熒光定量PCR技術(shù)的應(yīng)用20-21
• 4.2 高通量測序技術(shù)21-22
• 5. 研究的目的和意義22-23
• 第二章 硝酸鉀對湖羊瘤胃硝態(tài)氮消失率、發(fā)酵特性及血液高鐵血紅蛋白含量的影響23-37
• 1. 材料與方法24-27
• 1.1 試驗動物及試驗設(shè)計24
• 1.2 試驗日糧及飼養(yǎng)管理24-25
• 1.3 樣品的采集與分析25-26
• 1.3.1 樣品的采集及測定指標25
• 1.3.2 指標測定方法25-26
• 1.4 體外產(chǎn)氣試驗26-27
• 1.5 統(tǒng)計分析27
• 2 結(jié)果與分析27-33
• 2.1 不同硝酸鹽劑量對血液高鐵血紅蛋白含量的影響27
• 2.2 不同硝酸鹽劑量對瘤胃液pH值的影響27-28
• 2.3 瘤胃液硝酸鹽濃度的動態(tài)變化28-29
• 2.4 瘤胃液亞硝酸鹽濃度的動態(tài)變化29
• 2.5 不同硝酸鹽添加水平對氨態(tài)氮含量的影響29-30
• 2.6 不同硝酸鹽添加水平對微生物蛋白濃度的影響30-31
• 2.7 不同硝酸鹽添加水平對揮發(fā)性脂肪酸含量的影響31-32
• 2.8 不同硝酸鹽添加水平對體外產(chǎn)氣速率和凈產(chǎn)氣量的影響32-33
• 3. 討論33-36
• 4. 小結(jié)36-37
• 第三章 硝酸鉀對湖羊瘤胃細菌的影響37-46
• 1. 材料和方法37-40
• 1.1 試驗動物和樣品采集37-38
• 1.2 總DNA提取38
• 1.3 測序流程38-39
• 1.3.1 PCR擴增38
• 1.3.2 測序原始數(shù)據(jù)處理38-39
• 1.4 Real-time PCR分析39
• 1.5 數(shù)據(jù)分析39-40
• 2. 結(jié)果與分析40-43
• 2.1 硝酸鹽劑量對瘤胃細菌多樣性的影響40-41
• 2.2 硝酸鹽劑量對瘤胃細菌β多樣性的影響41
• 2.3 細菌組成和群落結(jié)構(gòu)分析41-43
• 2.4 添加不同濃度硝酸鹽對S.ruminatium和Cfetus相對倍數(shù)的影響43
• 3. 討論43-45
• 4. 小結(jié)45-46
• 第四章 日糧硝酸鉀劑量對湖羊瘤胃真菌和原蟲的影響46-53
• 1. 材料和方法46-47
• 1.1 試驗動物和樣品采集46
• 1.2 總DNA提取46-47
• 1.3 測序流程47
• 1.3.1 擴增18S V4區(qū)47
• 1.3.2 測序原始數(shù)據(jù)處理47
• 1.4 數(shù)據(jù)分析47
• 2. 結(jié)果與分析47-51
• 2.1 硝酸鹽劑量對瘤胃真菌和原蟲的多樣性分析47-48
• 2.2 硝酸鹽劑量對瘤胃真菌和原蟲p多樣性的影響48-49
• 2.3 日糧硝酸鉀劑量對湖羊瘤胃真菌和原蟲結(jié)構(gòu)的影響49-51
• 3. 討論51-52
• 4. 小結(jié)52-53
• 全文結(jié)論及進一步研究的問題53-54
• 1. 全文結(jié)論53
• 2. 進一步研究設(shè)想53-54
• 參考文獻54-63
• 致謝63-65
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄65-66

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本文編號：745028