發(fā)布時間：2017-08-26 23:18

  本文關(guān)鍵詞：副豬嗜血桿菌HAPS_RS00465蛋白的免疫保護性及其基因缺失株生物學特性研究

  更多相關(guān)文章： 副豬嗜血桿菌 HAPS_RS00465蛋白 免疫保護性 基因缺失 生物學特性

【摘要】：副豬嗜血桿菌(Haemophilus parasuis, Hps)在一定條件下引起豬群發(fā)生生以多發(fā)性漿膜炎、關(guān)節(jié)炎、腦膜炎等為特征的疾病,嚴重影響?zhàn)B豬業(yè)的發(fā)展。細菌肽ABC轉(zhuǎn)運體底物結(jié)合蛋白不僅介導細菌將肽類轉(zhuǎn)運進入細胞內(nèi)提供營養(yǎng),還參與許多重要的細胞活動,如細胞壁肽代謝循環(huán)、生物被膜形成、細胞間信號轉(zhuǎn)導、致病性等。此外,一些肽ABC轉(zhuǎn)運體底物結(jié)合蛋白還具有良好的免疫保護性。副豬嗜血桿菌HAPS_RS00465基因編碼一種肽ABC轉(zhuǎn)運體底物結(jié)合蛋白,為了初步明確該蛋白的免疫保護性,本研究對HAPS_RS00465基因進行了克隆表達,并以小鼠作為動物模型,對重組蛋白的免疫保護性進行了研究。同時,為了初步揭示HAPS_RS00465基因?qū)Ω必i嗜血桿菌生物學特性產(chǎn)生的影響,本研究構(gòu)建了HAPS_RS00465基因缺失株,并對基因缺失株的一些生物學特性進行了研究。研究結(jié)果如下：1.副豬嗜血桿菌HAPS_RS00465基因的克隆表達本研究以Hps M-3菌株的基因組為模板,PCR擴增其HAPS_RS00465基因,并將該基因克隆至T載體上。經(jīng)XhoI和ScaI酶切后,將目的基因插入到表達載體pET-39b中。經(jīng)PCR鑒定、酶切鑒定以及測序鑒定,成功構(gòu)建了重組表達載體pET-39b-HAPS_RS00465。將重組表達載體轉(zhuǎn)入表達菌BL21(DE3)中進行表達并對重組蛋白進行分離純化,獲得了HAPS_RS00465重組蛋白,分子量大小約70 kDa,與預期重組蛋白理論分子量大小一致。Western blot結(jié)果表明該重組蛋白能夠與Hps M-3菌g愕耐妹庋宸從，

本文編號：743176