本文關(guān)鍵詞：副豬嗜血桿菌HAPS_RS00465蛋白的免疫保護(hù)性及其基因缺失株生物學(xué)特性研究

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【摘要】：副豬嗜血桿菌(Haemophilus parasuis, Hps)在一定條件下引起豬群發(fā)生生以多發(fā)性漿膜炎、關(guān)節(jié)炎、腦膜炎等為特征的疾病,嚴(yán)重影響?zhàn)B豬業(yè)的發(fā)展。細(xì)菌肽ABC轉(zhuǎn)運(yùn)體底物結(jié)合蛋白不僅介導(dǎo)細(xì)菌將肽類(lèi)轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)提供營(yíng)養(yǎng),還參與許多重要的細(xì)胞活動(dòng),如細(xì)胞壁肽代謝循環(huán)、生物被膜形成、細(xì)胞間信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、致病性等。此外,一些肽ABC轉(zhuǎn)運(yùn)體底物結(jié)合蛋白還具有良好的免疫保護(hù)性。副豬嗜血桿菌HAPS_RS00465基因編碼一種肽ABC轉(zhuǎn)運(yùn)體底物結(jié)合蛋白,為了初步明確該蛋白的免疫保護(hù)性,本研究對(duì)HAPS_RS00465基因進(jìn)行了克隆表達(dá),并以小鼠作為動(dòng)物模型,對(duì)重組蛋白的免疫保護(hù)性進(jìn)行了研究。同時(shí),為了初步揭示HAPS_RS00465基因?qū)Ω必i嗜血桿菌生物學(xué)特性產(chǎn)生的影響,本研究構(gòu)建了HAPS_RS00465基因缺失株,并對(duì)基因缺失株的一些生物學(xué)特性進(jìn)行了研究。研究結(jié)果如下：1.副豬嗜血桿菌HAPS_RS00465基因的克隆表達(dá)本研究以Hps M-3菌株的基因組為模板,PCR擴(kuò)增其HAPS_RS00465基因,并將該基因克隆至T載體上。經(jīng)XhoI和ScaI酶切后,將目的基因插入到表達(dá)載體pET-39b中。經(jīng)PCR鑒定、酶切鑒定以及測(cè)序鑒定,成功構(gòu)建了重組表達(dá)載體pET-39b-HAPS_RS00465。將重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)入表達(dá)菌BL21(DE3)中進(jìn)行表達(dá)并對(duì)重組蛋白進(jìn)行分離純化,獲得了HAPS_RS00465重組蛋白,分子量大小約70 kDa,與預(yù)期重組蛋白理論分子量大小一致。Western blot結(jié)果表明該重組蛋白能夠與Hps M-3菌g愕耐妹庋宸從，

本文編號(hào)：743176