本文關鍵詞：不同信號通路抑制劑對釀酒酵母菌誘導綿羊瘤胃上皮細胞SBD-1表達的影響

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【摘要】：為了探索核因子-kB(nuclear factor-k-gene binding,NF-kB)和絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPKs)通路是否介導益生性釀酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae,SC)誘導綿羊瘤胃上皮細胞β-防御素-1(sheep beta-defensin-1,SBD-1)基因表達的調控機制。首先建立綿羊瘤胃上皮細胞培養(yǎng)體系作為體外試驗模型,將傳代細胞分為4個試驗組(SC+PDTC、SC+PD98059、SC+SB202190、SC+SP600125)、4個陰性對照組(PDTC、PD98059、SB202190、SP600125)、1個陽性對照組(SC)和1個空白對照組。向試驗組和陰性對照組內分別加入NFkB通路特異性抑制劑PDTC(50μmol/L)、MAPKs通路ERK 1/2特異性抑制劑PD98059(20μmol/L)、p38特異性抑制劑SB202190(20μmol/L)和JNK特異性抑制劑SP600125(20μmol/L)4種抑制劑,作用1h后,用PBS將各組細胞清洗3次,然后向試驗組和陽性對照組中分別添加濃度為5.2×107 CFU/mL的釀酒酵母菌液100μL,并向陰性對照組和空白對照組中分別添加等量的DMEM/F12培養(yǎng)液。將以上10組細胞置于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12h后提取各組細胞總RNA,利用實時熒光定量PCR技術檢測各組SBD-1 mRNA表達水平的變化。結果顯示:與陽性對照組相比,4種抑制劑對釀酒酵母菌促進瘤胃上皮細胞SBD-1的誘導表達都具有抑制作用,且存在極顯著性差異(P0.01),而各陰性對照組與空白對照組相比差異均不顯著(P0.05);4種抑制劑的抑制效果依次表現(xiàn)為SB202190PDTCSP600125PD98059,且SB202190抑制效果極顯著高于PDTC(P0.01),而PDTC抑制效果與SP600125、PD98059相比差異均不顯著(P0.05)。結果表明,NF-kB和MAPKs通路可能均介導釀酒酵母菌誘導綿羊瘤胃上皮細胞SBD-1的表達,但可能以MAPKs途徑為主要信號通路。
【作者單位】： 內蒙古農業(yè)大學獸醫(yī)學院;農業(yè)部動物疾病臨床診療技術重點實驗室;
【關鍵詞】： β-防御素- 瘤胃上皮細胞 釀酒酵母菌 抑制劑 信號通路 實時熒光定量PCR
【基金】：國家自然科學基金資助項目(31160491;31560682)
【分類號】：S826
【正文快照】： 防御素(defensins)是近年來在生物界中發(fā)現(xiàn)的一類富含半胱氨酸的陽離子內源性抗菌肽,具有廣譜的抗微生物活性,能參與機體抵抗微生物侵害的最初宿主防御活動,是內源性免疫體系的主要成分,在生物體的免疫反應中發(fā)揮著重要的作用[1]。哺乳動物防御素分為3類,即α-防御素、β-防御

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本文編號：740600