本文關鍵詞：雞免疫功能相關MHC B-LβⅡ基因篩選及一定純度中藥復方多糖對其免疫調節(jié)作用研究

  更多相關文章： MHC B-LβⅡ 多糖 細胞因子 免疫球蛋白 細胞轉化率 綿羊紅細胞抗體滴度

【摘要】：目的:本研究利用一定純度的中藥復方多糖,作用于MHC B-LβⅡ基因不同基因型的雞。通過檢測雞不同日齡各項免疫指標,探究一定純度中藥復方多糖對不同基因型雞的免疫調節(jié)作用,確定對不同基因型雞免疫調節(jié)作用的最佳中藥復方多糖的濃度,為中藥復方多糖在提高雞免疫能力方面的研究提供理論和試驗依據(jù)。方法:1、用水提醇沉法,對由當歸、黨參、熟地、川芎、山楂、何首烏等11味中藥組成的中藥復方進行粗多糖的提取。2、利用Sevage法除去粗多糖中的蛋白質成分后,將多糖經(jīng)過AB-8大孔吸附樹脂吸附解吸,除去色素及小分子雜質,進行粗多糖純化;再通過苯酚-硫酸法測定純化后多糖含量,獲得一定純度的中藥復方多糖。3、經(jīng)過DNA提取技術、PCR-SSCP技術和基因測序技術,對500羽黃麻肉雞雛雞進行DNA提取,以及基因分型。4、將一定純度的中藥復方多糖,配制成高劑量(50 mg/mL)、中劑量(25 mg/mL)、低劑量(12.5 mg/mL)3種不同濃度;對不同基因型的雞,分別進行新城疫疫苗免疫、分組、用藥,采集21、42、56、70四個日齡階段的雞外周血,分離血清。5、用ELISA方法檢測21、42、56、70四個日齡階段,雞血清中細胞因子(IL-2、IL-4、IL-6、IFN-α、IFN-γ)含量,新城疫抗體含量。6、用ELISA方法檢測21、42、56、70四個日齡階段,雞血清中CD4+、CD8+淋巴細胞亞群含量,IgG、IgM含量。7、用MTT法檢測21、42、56、70四個日齡階段,雞淋巴細胞轉化率,紅細胞凝集法檢測42、56、70三個日齡階,雞段綿羊紅細胞抗體滴度。結果:1、經(jīng)過提取純化后,利用苯酚-硫酸法檢測,得到含量為77.10%的中藥復方多糖。2、根據(jù)PCR-SSCP以及基因測序結果,共分出AA、AB、BB、AC、AD五種不同基因型。3、雞各項免疫指標檢測結果顯示,高劑量組中,AA基因型個體的各項免疫功能相關指標均高于其他四種基因型個體;中劑量組中,AB基因型個體的各項免疫功能相關指標均高于其他四種基因型個體;低劑量組中,AB基因型個體的各項免疫功能相關指標均高于其他四種基因型個體。結論:分析結果表明,MHC B-LβⅡ基因的多態(tài)性對中藥復方多糖最適免疫增強劑量的的篩選具有一定程度的影響,不同基因型雞中藥復方多糖的最佳劑量有所不同。同時,在三種不同濃度的中藥多糖中,以中劑量濃度的促進作用效果最好。
【關鍵詞】：MHC B-LβⅡ 多糖 細胞因子 免疫球蛋白 細胞轉化率 綿羊紅細胞抗體滴度
【學位授予單位】：石河子大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S853.7;S831
【目錄】：

• 摘要6-7
• Abstract7-11
• 英文縮略詞表11-12
• 引言12-13
• 第一章 文獻綜述13-24
• 1 中藥多糖的研究進展13-15
• 2 中藥多糖在動物免疫調節(jié)能力方面研究進展15-23
• 2.1 中藥多糖對免疫器官發(fā)育的促進作用16-17
• 2.2 中藥多糖對T淋巴細胞的免疫促進作用17-19
• 2.3 中藥多糖對B淋巴細胞的免疫促進作用19-20
• 2.4 中藥多糖對細胞因子的免疫促進作用20-22
• 2.5 中藥多糖對雞新城疫抗體效價(ND)以及綿羊紅細胞免疫抗體滴度(SRBC)的影響22
• 2.6 中藥多糖對免疫球蛋白的影響22-23
• 3 雞MHC B-L β基因多態(tài)性與免疫性狀的關系23-24
• 第二章 中藥復方多糖的提取純化24-28
• 1 材料與方法24-26
• 1.1 試驗材料24
• 1.2 試驗方法24-26
• 2 結果與分析26
• 2.1 葡萄糖標準曲線的繪制26
• 2.2 中藥復方多糖含量的計算26
• 3 討論26-27
• 4 結論27-28
• 第三章 免疫功能相關MHC B-L β II基因型雞的多態(tài)性分析28-33
• 1 材料與方法28-30
• 1.1 試驗材料28-29
• 1.2 試驗方法29-30
• 2 結果與分析30-32
• 2.1 PCR-SSCP基因型檢測30-31
• 2.2 基因序列結果分析31-32
• 3 討論32
• 4 結論32-33
• 第四章 一定純度中藥復方多糖對MHC B-LβⅡ不同基因型雞IL-2、IL-4、IL-6、TNF-α、IFN-γ血清濃度的影響33-41
• 1 材料與方法34-35
• 1.1 試驗材料34
• 1.2 試驗方法34-35
• 2 結果與分析35-39
• 2.1 一定純度中藥復方多糖對MHC B-LβⅡ不同基因型雞IL-2 含量的影響35-36
• 2.2 一定純度中藥復方多糖對MHC B-LβⅡ不同基因型雞IL-4 含量的影響36
• 2.3 一定純度中藥復方多糖對MHC B-LβⅡ不同基因型雞IL-6 含量的影響36-37
• 2.4 一定純度中藥復方多糖對MHC B-LβⅡ不同基因型雞IFN-γ含量的影響37-38
• 2.5 一定純度中藥復方多糖對MHC B-LβⅡ不同基因型雞TNF-α含量的影響38-39
• 3 討論39-40
• 4 結論40-41
• 第五章 一定純度中藥復方多糖對MHC B-LβⅡ不同基因型雞新城疫抗體效價以及IgG、Ig M血清濃度的影響41-47
• 1 材料與方法41-42
• 1.1 試驗材料41-42
• 1.2 試驗方法42
• 2 結果與分析42-45
• 2.1 一定純度中藥復方多糖對MHC B-LβⅡ不同基因型雞ND抗體含量的影響42-43
• 2.2 一定純度中藥復方多糖對MHC B-LβⅡ不同基因型雞IgG、IgM含量的影響43-45
• 3 討論45-46
• 4 結論46-47
• 第六章 一定純度中藥復方多糖對MHC B-LβⅡ不同基因型雞CD4+、CD8+含量，，淋巴細胞轉化率以及綿羊紅細胞滴度的影響47-54
• 1 材料與方法47-48
• 1.1 試驗材料47-48
• 1.2 試驗方法48
• 2 結果與分析48-52
• 2.1 一定純度中藥復方多糖對MHC B-LβⅡ不同基因型雞CD4+含量的影響48-49
• 2.2 一定純度中藥復方多糖對MHC B-LβⅡ不同基因型雞CD8+含量的影響49-50
• 2.3 一定純度中藥復方多糖對MHC B-LβⅡ不同基因型雞淋巴細胞轉化率的影響50-51
• 2.4 一定純度中藥復方多糖對MHC B-LβⅡ不同基因型雞SRBC滴度的影響51-52
• 3 討論52-53
• 4 結論53-54
• 全文結論54
• 創(chuàng)新點54-55
• 參考文獻55-62
• 致謝62-63
• 作者簡介63-64
• 導師評閱表64

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本文編號：739555