本文關鍵詞：伏馬菌素FB1對人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞的毒性作用研究

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【摘要】：伏馬菌素(Fumonisin,FB)大部分是由串珠鐮刀菌(Fusarium Vertieilliodes)和再育鐮刀菌(Fusarium Proliferatum)代謝出現(xiàn)的一種水溶性代謝物,是世界上常見的農(nóng)作物污染物之一。FB1(Fumonisin B1)是伏馬菌素主要成分,體內(nèi)研究證明,有肝毒性、肺水腫、神經(jīng)毒性和致癌性等癥狀,體外研究證明,FB1在不同的細胞系中有很強的毒性,本實驗以人臍靜脈內(nèi)皮細胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cells,HUVEC)為研究材料,采用免疫熒光、流式細胞術、RT-PCR等試驗技術,檢測不同劑量的FB1體外處理HUVEC不同時間的細胞增殖,細胞活力,細胞周期,氧化應激,細胞分泌,線粒體膜電位,和細胞凋亡和細胞凋亡相關基因表達的變化,試驗結果如下:(1)不同濃度(0,5,10和20μg/mL)的FB1處理HUVEC細胞,隨著FB1劑量的增加,細胞中LDH含量下調(diào),活性氧含量上調(diào)。結果顯示,FB1對HUVE細胞毒性作用隨劑量的增大而增強,表現(xiàn)為抑制細胞活力。(2)不同濃度(0,5,10和20μg/mL)的FB1處理HUVEC細胞48 h后,隨著FB1劑量的增加,細胞核濃縮,細胞周期G0/G1期升高,及線粒體膜電位降低。結果顯示,FB1能夠誘導HUVEC細胞發(fā)生凋亡且各組的凋亡率與毒素呈現(xiàn)出濃度依賴關系,FB1細胞周期是主要阻滯在G_0/G_1期,細胞凋亡可能受線粒體途徑的影響。(3)不同濃度(0和10μg/mL)的FB1處理HUVEC細胞48h后,采用RT-PCR方法測定Caspase-3、Caspase-9、Bax和Bcl-2等相關基因表達,結果顯示,Caspase-9和Bax基因表達水平升高,Caspase-3基因表達水平有一定程度的升高,Bcl-2基因表達水平有一定的下降,從而誘導HUVEC細胞凋亡。試驗結果表明:FB1對HUVEC細胞的毒性作用,表現(xiàn)為抑制細胞增殖,阻礙細胞因子合成以及誘導細胞凋亡。
【關鍵詞】：伏馬菌素 HUVEC細胞 細胞增殖 細胞周期 線粒體膜電位 細胞凋亡
【學位授予單位】：華南農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S859.8
【目錄】：

• 摘要3-4
• Abstract4-9
• 1 前言9-16
• 1.1 伏馬菌素的基本性質(zhì)9-10
• 1.2 伏馬菌素的毒性10
• 1.3 伏馬菌素的污染情況10-11
• 1.4 伏馬菌素的檢測方法和預防措施11
• 1.5 細胞凋亡的概念11-14
• 1.5.1 細胞凋亡的生物學特征12
• 1.5.2 細胞凋亡的通路12
• 1.5.3 線粒體通路12-13
• 1.5.4 死亡受體通路13-14
• 1.5.5 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的凋亡信號途徑14
• 1.6 細胞凋亡的檢測14-15
• 1.6.1 形態(tài)學觀察14
• 1.6.2 線粒體膜電位檢測14-15
• 1.6.3 DNA梯形條帶分析法15
• 1.6.4 細胞凋亡基因的檢測15
• 1.7 研究目的與意義15-16
• 2 材料與方法16-22
• 2.1 細胞株16
• 2.2 主要試劑16
• 2.3 主要儀器16-17
• 2.4 細胞形態(tài)、活力和毒性相關檢測17-18
• 2.4.1 細胞增殖和形態(tài)變化17
• 2.4.2 細胞活力檢測17
• 2.4.3 細胞毒性（LDH）的檢測17-18
• 2.4.4 ROS的檢測18
• 2.5 線綠體膜電位計凋亡相關檢測18-22
• 2.5.1 線粒體膜電位的檢測18-19
• 2.5.2 Hoechst33342染液檢測19
• 2.5.3 細胞周期檢測19
• 2.5.4 凋亡相關基因表達的檢測19-22
• 2.6 數(shù)據(jù)分析22
• 3 結果與分析22-31
• 3.1 FB1對HUVEC細胞形態(tài)、活力及毒性相關檢測結果22-26
• 3.1.1 FB1對HUVEC細胞增殖和形態(tài)變化的影響22-23
• 3.1.2 FB1對HUVEC細胞活力的影響23-24
• 3.1.3 FB1對細胞內(nèi)LDH產(chǎn)生的影響24-25
• 3.1.4 FB1對HUVEC細胞中ROS水平的影響25-26
• 3.2 HUVEC細胞凋亡相關指標的檢測26-31
• 3.2.1 線粒體膜電位的檢測結果26-27
• 3.2.2 Hoechst33342檢測結果27-28
• 3.2.3 FB1對HUVEC細胞周期的影響28-30
• 3.2.4 細胞凋亡相關基因的檢測30-31
• 4 討論31-37
• 4.1 FB1對HUVEC細胞形態(tài)、增殖及毒性影響31-33
• 4.2 HUVEC細胞周期的影響33-34
• 4.3 HUVEC細胞線綠體膜電位和凋亡的影響34-37
• 全文總結37-38
• 致謝38-39
• 參考文獻39-44

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本文編號：723249