本文關(guān)鍵詞：豬重要病毒檢測(cè)方法的建立及其在2015年陜西省豬群中的感染及抗體檢測(cè)

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【摘要】：豬瘟(CSF)、豬繁殖與呼吸綜合征(PRRS)、偽狂犬病(PR)、豬圓環(huán)病毒病(PCVD)是對(duì)當(dāng)前嚴(yán)重危害我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)的重要病毒性傳染病。病原的檢測(cè)是疾病診斷的最直接依據(jù),常用方法有病毒分離與鑒定、分子生物學(xué)檢測(cè)和血清學(xué)檢測(cè)(免疫過(guò)氧化物酶單層細(xì)胞試驗(yàn)、間接免疫熒光試驗(yàn)、中和試驗(yàn)和ELISA)等�？贵w水平是評(píng)價(jià)動(dòng)物免疫狀態(tài)最常用的指標(biāo),是制定免疫程序的重要依據(jù)。本研究建立了豬瘟病毒(CSFV)、豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)的雙重RT-PCR,偽狂犬病病毒(PRV)、豬細(xì)小病毒(PPV)和豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)的多重PCR檢測(cè)方法,為這些病毒的快速檢測(cè)提供了有用方法;建立了檢測(cè)CSFV和PCV2的免疫過(guò)氧化物酶單層細(xì)胞試驗(yàn)(IPMA)的方法,為在體外培養(yǎng)細(xì)胞上定量檢測(cè)非致細(xì)胞病變(nCPE)病毒提供了參考方法。分別對(duì)2015年在陜西省22個(gè)地區(qū)的規(guī)模化豬場(chǎng)、屠宰場(chǎng)、散養(yǎng)戶采集的696份豬血清進(jìn)行了CSFV、PRRSV、PRV和PCV2及其抗體水平檢測(cè)。獲得了以下結(jié)果:1.建立了檢測(cè)5種豬源病毒的雙重RT-PCR及多重PCR方法(1)建立了CSFV和PRRSV檢測(cè)方法。PCR最佳條件為,退火溫度60℃,引物終濃度均為0.4μmol/L;CSFV擴(kuò)增片段大小為438 bp、PRRSV為535 bp;CSFV的核酸檢測(cè)量為7.5 pg/μL,PRRSV的為14.2 pg/μL。(2)建立了PCV2、PRV和PPV的三重PCR檢測(cè)方法。PCR最佳條件為,退火溫度56℃,PCV2和PRV的引物終濃度為0.2μmol/L,PRV為0.3μmol/L;PCV2擴(kuò)增片段大小為880 bp、PRV為213 bp、PPV為295 bp;對(duì)PCV2 DNA的最低檢測(cè)量為6.9 pg/μL,PRV為9.2 pg/μL,PPV為8.6 pg/μL。2.分別建立了檢測(cè)CSFV、PCV2的IPMA檢測(cè)方法。CSFV、PCV2一抗(豬瘟陽(yáng)性血清、兔抗PCV2陽(yáng)性血清)稀釋濃度均為1:300,HRP-SPA濃度均為1:2000時(shí)有良好的敏感性和特異性。3.對(duì)2015年陜西省22個(gè)地區(qū)的696份豬血清樣品的檢測(cè)表明,CSFV抗體陽(yáng)性率為81%、PRRSV為70%、PCV2為83%、PRV-gI為21%,PRV-gB為38%。CSFV核酸陽(yáng)性率9%,PRRSV核酸陽(yáng)性率14%,PCV2核酸陽(yáng)性率23%,PRV核酸陽(yáng)性率為20%。2015年,陜西省豬群中存在這四種病毒的感染,CSFV、PRRSV和PRV-gB抗體有待提高;在個(gè)別豬場(chǎng)這四種病毒的感染率較高,存在發(fā)生疫病的風(fēng)險(xiǎn),應(yīng)引起足夠的重視,及時(shí)采取防控措施。
【關(guān)鍵詞】：病原檢測(cè) 核酸檢測(cè) 免疫過(guò)氧化物酶單層細(xì)胞 抗體檢測(cè) 風(fēng)險(xiǎn)分析
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S858.28
【目錄】：

• 摘要6-8
• ABSTRACT8-12
• 文獻(xiàn)綜述12-53
• 第一章 豬主要病毒性傳染病及其防控12-23
• 1.1 豬瘟及其防控進(jìn)展12-15
• 1.1.1 病原13
• 1.1.2 流行病學(xué)13
• 1.1.3 臨床癥狀及病理變化13-14
• 1.1.4 豬瘟的診斷14-15
• 1.1.5 豬瘟的防控15
• 1.2 豬繁殖與呼吸綜合征的防控進(jìn)展15-17
• 1.2.1 病原15-16
• 1.2.2 流行病學(xué)16
• 1.2.3 臨床癥狀及病理變化16
• 1.2.4 診斷方法16-17
• 1.2.5 防制17
• 1.3 偽狂犬病的防控進(jìn)展17-19
• 1.3.1 病原17-18
• 1.3.2 流行病學(xué)18
• 1.3.3 臨床癥狀及病理變化18
• 1.3.4 診斷18-19
• 1.3.5 防控19
• 1.4 豬圓環(huán)病毒病的防控進(jìn)展19-21
• 1.4.1 病原19-20
• 1.4.2 流行病學(xué)20
• 1.4.3 臨床癥狀及病理變化20-21
• 1.4.4 診斷21
• 1.4.5 防控21
• 1.5 本研究的目的及意義21-23
• 第二章 CSFV、PRRSV、PRV、PPV和PCV2多重RT-PCR和PCR檢測(cè)方法的建立23-37
• 2.1 材料與方法23-28
• 2.1.1 材料23-24
• 2.1.2 方法24-28
• 2.2 結(jié)果28-35
• 2.2.1 CSFV和PRRSV雙重PCR檢測(cè)方法的建立28-32
• 2.2.2 PCV2、PRV和PPV三重PCR檢測(cè)方法的建立32-35
• 2.3 討論35-36
• 2.4 小結(jié)36-37
• 第三章 檢測(cè)CSFV、PCV2免疫過(guò)氧化物酶單層細(xì)胞實(shí)驗(yàn)方法的建立37-43
• 3.1 材料與方法37-40
• 3.1.1 材料37-38
• 3.1.2 方法38-40
• 3.2 結(jié)果40-41
• 3.2.1 檢測(cè)CSFV的IPMA方法的建立40
• 3.2.2 檢測(cè)PCV2的IPMA方法的建立40-41
• 3.3 討論41-42
• 3.4 小結(jié)42-43
• 第四章 2015年陜西省豬群中CSF、PRRS、PR和PCVD病原和抗體檢測(cè)43-53
• 4.1 材料與方法43-46
• 4.1.1 材料43-44
• 4.1.2 方法44-46
• 4.2 結(jié)果46-51
• 4.2.1 2015年陜西省豬群四種病毒病抗體檢測(cè)46-49
• 4.2.2 四種重要病毒病在2015年陜西省不同縣（區(qū)）豬群的感染情況49-51
• 4.2.3 四種重要病毒病在2015年陜西省不同豬群的免疫抗體推算情況51
• 4.3 討論51-52
• 4.4 小結(jié)52-53
• 結(jié)論53-54
• 參考文獻(xiàn)54-58
• 縮略詞58-59
• 致謝59-60
• 作者簡(jiǎn)介60

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