本文關(guān)鍵詞：Pax6 PAI亞結(jié)構(gòu)域在黑色素細(xì)胞中對(duì)MITF、TYR、TYRP1和TYRP2的影響

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【摘要】：【目的】高度保守的PAX轉(zhuǎn)錄因子家族在黑色素細(xì)胞的分化和黑色素的生成中起重要的作用,其家族共有的PD結(jié)構(gòu)域是其與下游基因結(jié)合的主要位點(diǎn),而PD結(jié)構(gòu)域氨基端的PAI亞結(jié)構(gòu)域在其與下游基因的結(jié)合過(guò)程中發(fā)揮重要的作用。研究表明Pax6在視網(wǎng)膜上皮黑色素細(xì)胞的分化中發(fā)揮至關(guān)重要的作用,本試驗(yàn)借助研究Pax6 PAI亞結(jié)構(gòu)域的功能來(lái)對(duì)PAX轉(zhuǎn)錄因子家族共有的PD結(jié)構(gòu)域和PAI亞結(jié)構(gòu)域進(jìn)行研究。【方法】首先通過(guò)Psipred對(duì)Pax6 PD結(jié)構(gòu)域的結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析,使用NCBI對(duì)Pax6 PD結(jié)構(gòu)域與下游基因的結(jié)合位點(diǎn)進(jìn)行分析,使用Jaspar對(duì)MITF、TYR、TYRP1和TYRP2啟動(dòng)子中Pax6 PD結(jié)構(gòu)域可能的作用位點(diǎn)進(jìn)行預(yù)測(cè)。使用普通PCR克隆Pax6PAI亞結(jié)構(gòu)域,將其連入T載體,酶切后連入慢病毒載體,并送公司測(cè)序確認(rèn)。將構(gòu)建好的PAI亞結(jié)構(gòu)域過(guò)表達(dá)載體通過(guò)細(xì)胞轉(zhuǎn)染導(dǎo)入到培養(yǎng)的小鼠黑色素細(xì)胞中,使其過(guò)量表達(dá)。收集細(xì)胞,分別通過(guò)觀察綠色熒光蛋白檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率,使用RT-PCR和Western blot來(lái)檢測(cè)MITF、TYR、TYRP1和TYRP2在m RNA和蛋白水平的變化,同時(shí)檢測(cè)黑色素細(xì)胞中黑色素生成量的變化。【結(jié)果】通過(guò)NCBI分析可知,Pax6 PD結(jié)構(gòu)域與下游基因的作用位點(diǎn)主要集中在氨基端的PAI亞結(jié)構(gòu)域。通過(guò)Jaspar預(yù)測(cè)分析,得知,MITF啟動(dòng)子-695處存在Pax6 PD結(jié)構(gòu)域的結(jié)合位點(diǎn),TYR啟動(dòng)子-873和-1133處存在Pax6 PD結(jié)構(gòu)域的結(jié)合位點(diǎn),TYRP1啟動(dòng)子-629處存在Pax6 PD結(jié)構(gòu)域的結(jié)合位點(diǎn),TYRP2啟動(dòng)子-655處存在Pax6 PD結(jié)構(gòu)域的結(jié)合位點(diǎn)。在黑色素細(xì)胞中過(guò)表達(dá)Pax6 PAI亞結(jié)構(gòu)域后,與空載組相比,試驗(yàn)組MITF m RNA升高2.05倍(P0.01),蛋白質(zhì)升高1.7倍(P0.01);TYR m RNA升高2.09倍,蛋白質(zhì)升高2倍(P0.05);TYRP1 m RNA升高2.93倍(P0.05),蛋白質(zhì)升高1.9倍(P0.01);TYRP2 m RNA升高3.62倍(P0.01),蛋白質(zhì)升高1.37倍。同時(shí)試驗(yàn)組的黑色素含量是空載組黑色素含量的1.33倍(P0.001)�！窘Y(jié)論】在小鼠黑色素細(xì)胞中,過(guò)表達(dá)Pax6 PAI亞結(jié)構(gòu)域可以促進(jìn)MITF、TYR、TYRP1和TYRP2的表達(dá),進(jìn)而使黑色素細(xì)胞黑色素的生成量增加。
【作者單位】： 山西農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院;山西醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： PAI亞結(jié)構(gòu)域 Pax 黑色素
【基金】：國(guó)家高技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃(863計(jì)劃,2013AA102506) 國(guó)家公益性行業(yè)(農(nóng)業(yè))科研專(zhuān)項(xiàng)(201303119) 山西農(nóng)業(yè)大學(xué)創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)建設(shè)計(jì)劃項(xiàng)目(CXTD201201)
【分類(lèi)號(hào)】：S852.2
【正文快照】： homeodomain(HD)的完整分子結(jié)構(gòu)執(zhí)行其功能,而0引言且每一個(gè)亞結(jié)構(gòu)域也有其獨(dú)特的功能[8]�！颈狙芯壳小狙芯恳饬x】哺乳動(dòng)物皮膚黑色素細(xì)胞是由神經(jīng)入點(diǎn)】Pax6已被證明在黑色素細(xì)胞的分化和黑色素嵴祖細(xì)胞定向分化而來(lái)[1],其正常分化依靠相關(guān)基因的生成中發(fā)揮重要作用[12-13]

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1 崔嘉;孫守榮;苗魯旭;席冬梅;何奕多;毛華明;鄧衛(wèi)東;;TYRP1基因控制動(dòng)物色素形成的研究進(jìn)展[J];中國(guó)畜牧獸醫(yī);2009年09期

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1 徐瑩;TYR、TYRP1基因與朝鮮鵪鶉羽色相關(guān)性研究[D];河南科技大學(xué);2014年

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本文編號(hào)：705980