本文關鍵詞：奇異變形桿菌與A亞群禽白血病病毒在SPF雞中共感染的研究

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【摘要】：與禽白血病混合感染的病原較多,使得雞群疾病防控和凈化更復雜困難,引起了人們對該病的重視。本試驗對雞胚卵黃中分離到的奇異變形桿菌進行分離鑒定,同時對奇異變形桿菌和ALV-A在SPF雞中共感染進行研究。1.本研究從死亡雞胚的卵黃中分離到的疑似奇異變形桿菌的菌株,通過細菌培養(yǎng)、革蘭氏染色鏡檢以及生化特性測定以及16S r RNA基因比對對分離菌進行鑒定。結果顯示,分離菌的培養(yǎng)特性、革蘭氏染色鏡檢以及生化特性符合奇異變形桿菌的特性,初步鑒定為奇異變形桿菌;應用PCR方法擴增出1465 bp的16S rRNA基因片段。經(jīng)BLAST對比分析表明,與其同源性最高的均為奇異變形桿菌各株系的16S rRNA序列,同源性高達99%以上。檢測結果表明,該分離菌為雞奇異變形桿菌。2.將分離并鑒定的雞奇異變形桿菌,經(jīng)傳代培養(yǎng)、滅活、調(diào)整抗原濃度、無菌檢測以及染色等方法,制備該菌的凝集抗原,并利用該抗原與弗氏佐劑(Freund's Adjuvant)混合免疫兔子制備該菌的標準陽性血清。結果顯示,用甲醛滅活細菌制備的抗原比加熱滅活的靈敏度要高,且抗原最佳滅活條件為0.5%的甲醛溶液(24 h);凝集抗原的最適濃度為8.05×109 CFU/mL;最佳的染色液為草酸銨結晶紫染色液。制備的該菌的陽性血清經(jīng)試管凝集試驗測得效價可達1:512。3.建立SPF雛雞感染奇異變形桿菌和ALV-A的免疫抑制模型。將120只14日齡SPF雞隨機分4組,各組隔離飼養(yǎng),分別為ALV-A組、PM組、PM+ALV-A組,空白對照組。每組雞于第1、2、3、4、5、6周隨機取3只,檢測相關指標。結果顯示,感染后第2-3周,各感染組均有部分雞出現(xiàn)臨床癥狀,共感染組死亡率(26.7%)要高于ALV-A組(20%)、PM組(16.7%)。各感染組胸腺、脾臟、法氏囊等免疫器官指數(shù)不同程度的低于對照組,并且共感染組加重對免疫器官的損傷程度。感染雞在6周齡,肉眼觀察內(nèi)臟器官無明顯的腫大或腫瘤結節(jié),病理組織學觀察到在肝臟、脾臟、胸腺、法氏囊等器官內(nèi)呈現(xiàn)淋巴細胞樣瘤細胞和出血現(xiàn)象。外周血T淋巴細胞數(shù)檢測、雞白細胞介素(IL-2)和干擾素(IFN-γ)檢測結果顯示,單感染和共感染組的CD~(4+)、CD~(8+)T細胞數(shù)、白細胞介素(IL-2)和干擾素(IFN-γ)的分泌量均低于對照組,并且共感染時免疫抑制程度最明顯。雞體內(nèi)P27抗原和ALV-A抗體水平波動很大,呈現(xiàn)一定的負相關。該菌是奇異變形桿菌,研制的凝集抗原可用于雞奇異變形桿菌感染或免疫后抗體的檢測。奇異變形桿菌與ALV-A具有協(xié)同致病作用,共感染對SPF雞的危害要比單感染嚴重。
【關鍵詞】：奇異變形桿菌 分離鑒定 A亞群禽白血病病毒 共感染
【學位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S858.31
【目錄】：

• 符號及縮略詞說明4-9
• 中文摘要9-11
• ABSTRACT11-13
• 1 前言13-25
• 1.1 奇異變形桿菌綜述13-20
• 1.1.1 病原學13-16
• 1.1.2 流行病學16-17
• 1.1.3 臨床癥狀和病理變化17
• 1.1.4 檢測方法17-19
• 1.1.5 防治19-20
• 1.2 禽白血病病毒（ALV）的研究進展20-24
• 1.2.1 ALV的基本結構20-21
• 1.2.2 ALV的理化特性21
• 1.2.3 ALV的核酸和基因組結構21-22
• 1.2.4 ALV臨床癥狀及病理變化22-23
• 1.2.5 禽白血病的檢測和診斷23-24
• 1.2.6 防治24
• 1.3 試驗的目的和意義24-25
• 2 材料與方法25-36
• 2.1 病毒、菌株、細胞25
• 2.2 試驗動物25
• 2.3 實驗試劑及儀器設備25-26
• 2.4 細菌的分離鑒定及 16S r RNA序列測定26-30
• 2.4.1 細菌的分離以及生化鑒定26-27
• 2.4.2 藥敏試驗27
• 2.4.3 分離菌 16S rRNA的擴增27-30
• 2.5 奇異變形桿菌凝集抗原的制備30-32
• 2.5.1 細菌的培養(yǎng)30
• 2.5.2 細菌滅活30
• 2.5.3 細菌滅活效果的檢測30
• 2.5.4 不同滅活方法處理的抗原反應原性檢測30-31
• 2.5.5 抗原最佳工作濃度的確定31
• 2.5.6 不同染色液染色效果的檢測31
• 2.5.7 凝集抗原的特異性檢測31
• 2.5.8 血清的制備31-32
• 2.6 奇異變形桿菌與ALV-A共感染致病性研究32-35
• 2.6.1 病毒擴增及定量32
• 2.6.2 雞奇異變形桿菌半數(shù)致死量測定32-33
• 2.6.3 實驗分組及采樣33
• 2.6.4 雞群生長性能的變化33
• 2.6.5 對免疫器官指數(shù)的測定33
• 2.6.6 臨床癥狀及組織病理學觀察33-34
• 2.6.7 血清中細胞介素 2（IL-2）、γ-干擾素（INF-γ）的檢測34
• 2.6.8 外周血CD~(4+)、CD~(8+) T淋巴細胞的檢測34-35
• 2.6.9 P27抗原及ALV-A抗體的檢測35
• 2.6.10 奇異變形桿菌抗體的檢測35
• 2.7 數(shù)據(jù)分析35-36
• 3 結果與分析36-49
• 3.1 細菌的分離鑒定及 16S rRNA序列測定36-38
• 3.1.1 細菌的分離以及生化鑒定結果36-38
• 3.1.2 PCR擴增及測序結果38
• 3.1.3 藥敏試驗結果38
• 3.2 奇異變形桿菌凝集抗原制備的結果38-40
• 3.2.1 細菌滅活檢測結果38-39
• 3.2.2 不同滅活方法制備的抗原反應原性的檢測結果39
• 3.2.3 最佳抗原濃度的確定結果39
• 3.2.4 不同染色液染色后抗原敏感性的檢測結果39-40
• 3.2.5 抗原的特異性檢測結果40
• 3.2.6 奇異變形桿菌陽性血清效價測定結果40
• 3.3 奇異變形桿菌與ALV-A在SPF雞中共感染的研究40-49
• 3.3.1 病毒定量以及雞奇異變形桿菌半數(shù)致死量測定結果40-41
• 3.3.2 對SPF雞生長性能的影響41
• 3.3.3 對免疫器官指數(shù)的影響41-43
• 3.3.4 臨床癥狀及組織病理學變化43-45
• 3.3.5 血清中IL-2、INF-γ濃度檢測結果45-46
• 3.3.6 外周血CD~(4+)、CD~(8+) T淋巴細胞檢測結果46-47
• 3.3.7 P27抗原及ALV-A抗體的檢測結果47-48
• 3.3.8 奇異變形桿菌抗體檢測結果48-49
• 4 討論49-53
• 4.1 細菌的分離鑒定49
• 4.2 奇異變形桿菌凝集抗原的制備49-50
• 4.3 PM與ALV-A共感染對SPF雞的影響50-53
• 5 結論53-54
• 6 創(chuàng)新點54-55
• 參考文獻55-67
• 致謝67-68
• 碩士期間發(fā)表的論文68-69
• 附錄69

【參考文獻】

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本文編號：669993