本文關(guān)鍵詞：鴨坦布蘇病毒病EDⅢ-ELISA方法的建立

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【摘要】：為建立鴨坦布蘇病毒抗體ELISA檢測方法,采用RT-PCR擴增鴨坦布蘇病毒ZJSBL01株E蛋白結(jié)構(gòu)域III(EDIII)基因,將其克隆至原核表達載體p ET-28a,轉(zhuǎn)化到BL21(DE3)中,經(jīng)IPTG誘導表達,獲得了重組EDIII蛋白。利用EDIII蛋白作為包被抗原,建立了檢測DTMUV Ig G抗體的間接ELISA方法,并對反應(yīng)條件進行優(yōu)化。最終確定抗原包被濃度為4μg/m L、血清稀釋度為1:40、抗原包被條件為37℃包被4 h、封閉液為含3%BSA的PBST、封閉條件為37℃封閉2 h、酶標二抗稀釋度為1:1 000、底物反應(yīng)時間為15min作為ELISA的最佳反應(yīng)條件。當檢測樣品S/P大于0.306判定為陽性。建立的ELISA檢測方法特異性強、重復性好,對開展鴨坦布蘇病毒抗體檢測及血清學調(diào)查具有重要意義。
【作者單位】： 華南農(nóng)業(yè)大學動物科學學院;廣東溫氏食品集團股份有限公司;
【關(guān)鍵詞】： 鴨坦布蘇病毒 EDⅢ蛋白 間接ELISA
【基金】：廣東省科技計劃項目(2015A020209137)
【分類號】：S858.32
【正文快照】： 鴨坦布蘇病毒(Duck Tembusu virus,DT-MUV)是近年來從產(chǎn)蛋鴨中新分離的一種黃病毒[1]。該病毒主要引起感染的產(chǎn)蛋鴨采食量下降,隨后產(chǎn)蛋率迅速下降,10天內(nèi)產(chǎn)蛋率降到10%以內(nèi),發(fā)病率高達90%,死亡率在5%~30%之間,發(fā)病鴨頭頸抽搐,共濟失調(diào),甚至癱瘓,出現(xiàn)嚴重的卵巢出血、卵巢炎、

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本文編號：653201