本文關鍵詞：應用多重GeXP-PCR同時檢測6種雞免疫抑制病病毒的研究

  更多相關文章： GeXP多基因表達分析系統(tǒng) 多重PCR 高通量 雞免疫抑制病病毒

【摘要】：擬建立一種基于GeXP多基因表達分析系統(tǒng)的多重PCR方法,同時檢測6種雞免疫抑制病病毒——雞馬立克病毒、禽白血病病毒(包括A、B和J亞群)、禽網狀內皮組織增生癥病毒、禽呼腸孤病毒、雞傳染性貧血病毒和傳染性法氏囊炎病毒。多重PCR反應使用嵌合引物和通用引物組合的反應體系,經過GeXP多基因表達分析系統(tǒng)進行毛細管電泳,鑒別PCR產物片段;通過調整嵌合引物濃度、Mg~(2+)濃度、Taq酶濃度優(yōu)化反應體系及調整退火溫度和時間優(yōu)化反應條件。應用建立的多重GeXP-PCR,分別單獨和同時檢測6種雞免疫抑制病病毒的8個目的基因,同時以其他常見禽類病毒和雞組織器官核酸為對照,驗證其特異性;檢測8個目的基因不同濃度的克隆質粒,驗證其敏感性;應用建立的多重PCR檢測300份臨床樣品,并同時用熒光定量PCR和測序驗證其檢測結果的準確性。結果表明建立的多重GeXP-PCR方法能夠分別擴增出6種病毒,8個特異性目的片段,不能擴增其他常見禽類病毒和雞組織器官的基因;在低至100copies·20μL~(-1)的水平能同時特異性地檢測出6種雞免疫抑制病病毒核酸;檢測300份臨床病死雞樣品,190份樣品顯示為陽性,PCR和測序結果與多重GeXP-PCR結果相符。本研究建立的多重GeXP-PCR方法可特異、敏感、高通量地檢測6種雞免疫抑制性病毒,可用于臨床鑒別診斷和分子流行病學調查,具有很高的臨床應用價值。
【作者單位】： 廣西壯族自治區(qū)獸醫(yī)研究所廣西畜禽疫苗新技術重點試驗室;
【關鍵詞】： GeXP多基因表達分析系統(tǒng) 多重PCR 高通量 雞免疫抑制病病毒
【基金】：國家自然科學基金(31160512) 廣西自然科學基金(2014GXNSFCA118006) 廣西特聘專家專項基金(2011B020) 廣西水產畜牧獸醫(yī)局科技項目(桂漁牧科201452003;201528013)
【分類號】：S858.31
【正文快照】： 雞免疫抑制病病毒主要包括雞馬立克病毒(Marek’s disease virus,MDV)[1]、禽白血病病毒(avian leucosis virus,ALV,以A、B和J亞群ALV為主)[2]、禽網狀內皮組織增生癥病毒(reticuloen-dotheliosis virus,REV)[3]、禽呼腸孤病毒(avianreovirus,ARV)[4]、雞傳染性貧血病毒(chick

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本文編號：653112