本文關(guān)鍵詞：牛GHR基因與miR-139靶向關(guān)系的驗(yàn)證

  更多相關(guān)文章： 牛 生長(zhǎng)激素受體 ′非翻譯區(qū) miR-

【摘要】：旨在構(gòu)建牛生長(zhǎng)激素受體(Growth hormone receptor,GHR)基因3′非翻譯區(qū)(Untranslated region,UTR)雙熒光素酶載體,并確定miR-139與牛GHR基因的靶向關(guān)系。本研究采用生物信息學(xué)方法預(yù)測(cè)miR-139與牛GHR基因3′UTR的結(jié)合位點(diǎn);人工合成牛GHR基因3′UTR及突變型片段并克隆至雙熒光素酶載體psiCHECK-2上,構(gòu)建野生型(psiCHECK2-GHR-W 3′UTR)及突變型(psiCHECK2-GHR-M 3′UTR)雙熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒。將培養(yǎng)的Hela細(xì)胞分為4組,分別共轉(zhuǎn)染miR-139mimic或陰性對(duì)照和psiCHECK2-GHR-W 3′UTR重組質(zhì)�；騪siCHECK2-GHR-M 3′UTR重組質(zhì)粒,然后用雙熒光素酶檢測(cè)試劑盒檢測(cè)4組細(xì)胞中熒光素酶活性。之后培養(yǎng)奶牛乳腺上皮細(xì)胞,分別設(shè)對(duì)照組、陰性對(duì)照組、miR-139 mimic及miR-139inhibitor組,對(duì)陰性對(duì)照組、miR-139mimic組及miR-139inhibitor組分別轉(zhuǎn)染陰性對(duì)照、miR-139mimic或miR-139inhibitor,利用qPCR(Realtime quantitative PCR)進(jìn)一步檢測(cè)各組miR-139及GHR基因的mRNA表達(dá)。結(jié)果,通過雙酶切試驗(yàn)證實(shí)成功構(gòu)建了野生型及突變型重組雙熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒psiCHECK2-GHR-W 3′UTR和psiCHECK2-GHR-M 3′UTR;當(dāng)野生型重組質(zhì)粒psiCHECK2-GHR-W 3′UTR和miR-139mimic共轉(zhuǎn)染Hela細(xì)胞后,雙熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒表達(dá)的熒光素酶活性顯著低于其他處理組(P0.05)。qPCR進(jìn)一步證實(shí)miR-139能顯著下調(diào)奶牛乳腺上皮細(xì)胞中GHR基因mRNA的表達(dá)(P0.05)。本研究成功構(gòu)建了牛野生型及突變型GHR基因3′UTR雙熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒;雙熒光素酶試驗(yàn)及qPCR證實(shí)miR-139與牛GHR基因3′UTR存在靶向關(guān)系。
【作者單位】： 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 牛 生長(zhǎng)激素受體 ′非翻譯區(qū) miR-
【基金】：國(guó)家自然基金青年基金(31401093) 留學(xué)回國(guó)人員科研啟動(dòng)基金 黑龍江省教育廳科研項(xiàng)目(12541018)
【分類號(hào)】：S823
【正文快照】： microRNAs(miRNAs)是約22個(gè)核苷酸、進(jìn)化上保守、內(nèi)源性非編碼的RNA,以序列特異性的方式結(jié)合至靶mRNA的3′-非翻譯區(qū)(3′UTR),可在轉(zhuǎn)錄后通過抑制轉(zhuǎn)錄或下調(diào)mRNA表達(dá)來調(diào)節(jié)基因表達(dá)[1-2]。研究發(fā)現(xiàn)每個(gè)miRNA可調(diào)節(jié)約200個(gè)mRNA,每個(gè)mRNA有多重潛在靶基因位點(diǎn)與miRNA結(jié)合[3-4]。

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中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 黃樂天;蔣琳蘭;;熒光素及其合成的研究進(jìn)展[J];生物技術(shù)通報(bào);2006年03期

2 陳勝利;唐文雅;郝華芳;王興龍;劉陽坤;付向晶;張鵬;賀生芳;杜恩岐;楊增岐;;雞IFN-β啟動(dòng)子熒光素酶報(bào)告載體的構(gòu)建與活性檢測(cè)[J];中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào);2013年06期

3 魏歡;李仲文;沈清武;;小鼠miR-151-3p靶基因篩選和鑒定[J];西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào);2014年05期

4 ;基因標(biāo)記、轉(zhuǎn)化、表達(dá)與檢測(cè)[J];生物技術(shù)通報(bào);1992年10期

5 ;[J];;年期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 許豐雯;徐丹;王明曉;陳啟民;耿運(yùn)琪;喬文濤;;以熒光素酶為報(bào)告基因定量檢測(cè)原型泡沫病毒的指示細(xì)胞系的建立[A];2010年第四屆全國(guó)微生物遺傳學(xué)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要集[C];2010年

2 劉亞寧;劉成剛;趙新華;朱美財(cái);陳濤;;利用生物發(fā)光測(cè)定PBP對(duì)熒光素酶復(fù)性的促進(jìn)作用[A];第九次全國(guó)生物物理大會(huì)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2002年

3 李風(fēng)云;余軍平;張治平;崔宗強(qiáng);王殿冰;危宏平;張先恩;;溶液增強(qiáng)Gaussia熒光素酶的BRET傳感器檢測(cè)蛋白酶[A];中國(guó)化學(xué)會(huì)第28屆學(xué)術(shù)年會(huì)第4分會(huì)場(chǎng)摘要集[C];2012年

4 梁紅茹;譚業(yè)平;頓燦;郭霄峰;;熒光素酶標(biāo)記狂犬病毒rHEP-luc株的生物學(xué)特性研究[A];2010全國(guó)狂犬病防控高層論壇論文集[C];2010年

5 朱曉宇;桑建利;;G1期cyclin和CDK對(duì)pold1基因啟動(dòng)子活性的調(diào)控作用[A];中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)2005年學(xué)術(shù)大會(huì)、青年學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要集[C];2005年

6 陳靜;葉平;劉永學(xué);;亞油酸對(duì)1型纖溶酶原激活物抑制劑表達(dá)的影響及其機(jī)制[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)心血管病學(xué)分會(huì)第八次全國(guó)心血管病學(xué)術(shù)會(huì)議匯編[C];2006年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 記者 符王潤(rùn) 通訊員 習(xí)文江;螢火蟲提取物實(shí)現(xiàn)快速檢驗(yàn)微生物[N];廣東科技報(bào);2008年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前8條

1 饒林;特異性靶向IRES的抗丙型肝炎病毒核酸藥物及影響IRES功能的因素研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2004年

2 張靜;神經(jīng)元限制性沉默因子對(duì)CART基因轉(zhuǎn)錄的調(diào)控作用及其機(jī)制研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2011年

3 姜軼群;利用海腎熒光素酶雙分子互補(bǔ)技術(shù)研究Hsp90/Cdc37相互作用[D];吉林大學(xué);2010年

4 龔鳳英;細(xì)胞因子對(duì)垂體人生長(zhǎng)激素基因表達(dá)的調(diào)節(jié)及其機(jī)理的研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2003年

5 高博;熒光素酶標(biāo)記的HCV細(xì)胞模型的建立及其在藥物評(píng)價(jià)等方面的應(yīng)用[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2011年

6 趙榮蘭;新發(fā)現(xiàn)甲狀腺激素受體β亞型的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2011年

7 楊儉;白介素-6對(duì)人肝臟藥物代謝酶（HCE1、HCE2、CYP3A4）表達(dá)的影響及分子機(jī)制[D];南京醫(yī)科大學(xué);2008年

8 趙理;多巴胺受體DRD1 mRNA 3' UTR在DRD1轉(zhuǎn)錄后水平表達(dá)調(diào)控中的作用[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2009年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張熠;MiR-106b在ATD致粒細(xì)胞缺乏發(fā)生中的作用及機(jī)制[D];南華大學(xué);2015年

2 溫曉梨;調(diào)控DUSP1(MKP-1)基因表達(dá)的特異性RNA結(jié)合蛋白及microRNA的篩選[D];南方醫(yī)科大學(xué);2013年

3 于浩然;理性設(shè)計(jì)改造熒光素酶的熱穩(wěn)定性[D];天津大學(xué);2014年

4 柴繼田;基于豬CCR1和CCR5受體高通量細(xì)胞篩選模型的構(gòu)建及其條件優(yōu)化[D];揚(yáng)州大學(xué);2015年

5 劉艷杰;重組螢火蟲熒光素酶及其穩(wěn)定性研究[D];天津大學(xué);2010年

6 夏蕾;重組大腸桿菌表達(dá)熒光素酶的研究[D];江南大學(xué);2008年

7 梅冊(cè)霞;細(xì)菌熒光素酶體外發(fā)光體系的研究及在水產(chǎn)品致病菌檢測(cè)中的應(yīng)用[D];中國(guó)海洋大學(xué);2010年

8 王慶培;熒光素酶生物發(fā)光法快速評(píng)價(jià)消毒效果的初步研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2006年

9 李雪瑩;用于活體成像技術(shù)的表達(dá)熒光素酶人肝癌細(xì)胞系的建立及驗(yàn)證[D];天津醫(yī)科大學(xué);2012年

10 周鑫;穩(wěn)定表達(dá)熒光素酶的MDA-MB-231乳腺癌細(xì)胞系的構(gòu)建及其活性表征[D];東北師范大學(xué);2015年

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