本文關(guān)鍵詞：雞ADRA1B和PPARGC1B基因在卵泡中的時(shí)空表達(dá)及其新SNPs對(duì)產(chǎn)蛋性狀的遺傳效應(yīng)

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【摘要】：ADRA1B基因是G蛋白偶聯(lián)受體家族成員之一,它不僅可以激活有絲分裂,還可以調(diào)節(jié)許多細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖。PPARGC1B基因是一種調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄的共激活劑,對(duì)轉(zhuǎn)錄因子和核受體活動(dòng),脂肪氧化,糖酵解以及能量代謝等多種生物學(xué)過程具有調(diào)控作用。已有研究表明,ADRA1B和PPARGC1B基因在哺乳動(dòng)物的卵巢中對(duì)卵泡的發(fā)育,篩選以及成熟也具有一定的調(diào)控作用。然而,目前國(guó)內(nèi)外關(guān)于ADRA1B和PPARGC1B基因在雞卵泡發(fā)育中的調(diào)控作用鮮有報(bào)道。因此,本研究采用RT-RCR和免疫組織化學(xué)方法探討ADRA1B和PPARGC1B基因在雞卵泡發(fā)育中的時(shí)空表達(dá)規(guī)律和特點(diǎn);通過PCR-SSCP對(duì)候選基因進(jìn)行序列單核苷酸多態(tài)性分析、篩選SNPs、進(jìn)行產(chǎn)蛋性狀關(guān)聯(lián)分析,篩查與雞產(chǎn)蛋性狀相關(guān)的潛在分子標(biāo)記,為育種工作者用于以雞產(chǎn)蛋性狀為主要育種目標(biāo)的分子標(biāo)記輔助育種選擇提供依據(jù)。實(shí)驗(yàn)一,以150日齡海蘭褐蛋雞為供試材料,采用半定量RT-PCR方法測(cè)定分析雞卵巢的間質(zhì)組織、前等級(jí)卵泡和等級(jí)卵泡中ADRA1B和PPARGC1B基因mRNA表達(dá)水平。結(jié)果表明,ADRA1B基因mRNA在雞的各等級(jí)卵泡中均有較低的相對(duì)表達(dá)量。其中,F2中ADRA1B基因mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著高于1-4mm、6-7mm、7-8mm、F4、F5,間質(zhì)中相對(duì)表達(dá)量顯著高于6-7mm、F4(P0.05),其他各等級(jí)卵泡中則差異不顯著(P0.05)。PPARGC1B基因mRNA在各等級(jí)卵泡中均有表達(dá)且相對(duì)表達(dá)量差異顯著(P0.05),等級(jí)前后均先下降再上升。其中,間質(zhì)中PPARGC1B基因mRNA的相對(duì)表達(dá)量顯著高于等級(jí)F3和F4(P㩳0.05),其他各等級(jí)卵泡中的相對(duì)表達(dá)量則差異不顯著(P0.05)。實(shí)驗(yàn)二,以150日齡海蘭褐蛋雞為供試材料,采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)ADRA1B和PPARGC1B基因在卵巢不同前等級(jí)卵泡中的蛋白質(zhì)表達(dá)定位。結(jié)果表明,ADRA1B基因在前等級(jí)卵泡的間質(zhì)和卵母細(xì)胞中均檢測(cè)到陽(yáng)性信號(hào),隨著卵泡的生長(zhǎng)發(fā)育,在大白卵泡顆粒細(xì)胞中也檢測(cè)到陽(yáng)性信號(hào)。PPARGC1B基因在前等級(jí)卵泡的間質(zhì)和卵母細(xì)胞中均檢測(cè)到陽(yáng)性信號(hào)。實(shí)驗(yàn)三,以大骨雞為供試材料,采用PCR-SSCP方法進(jìn)行基因分型、序列比對(duì),篩選出SNPs,進(jìn)行產(chǎn)蛋性狀關(guān)聯(lián)分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn),ADRA1B基因在Exon2片段中檢測(cè)到A1915G轉(zhuǎn)換,此轉(zhuǎn)換帶來蛋白質(zhì)氨基酸殘基非同義替換(天冬氨酸-489-甘氨酸)。根據(jù)SNP A1915G將大骨雞分為AA和AG基因型,其中,AA基因型為優(yōu)勢(shì)基因型。在30,43,57,66周齡產(chǎn)蛋量和30,43周齡蛋重的產(chǎn)蛋性狀中,AG基因型顯著高于AA基因型(P㩳0.05)。PPARGC1B基因在3’非編碼區(qū)檢測(cè)到T6146C轉(zhuǎn)變,根據(jù)SNP T6146C將大骨雞分為TT和TC基因型,其中,TT基因型為優(yōu)勢(shì)基因型。在57,66周齡產(chǎn)蛋量和30,43周齡蛋重的產(chǎn)蛋性狀中,TC基因型顯著高于TT基因型(P㩳0.05)。此證實(shí),新SNPs為雞產(chǎn)蛋性狀潛在的分子標(biāo)記,為用于以雞產(chǎn)蛋性狀為主要育種目標(biāo)的分子標(biāo)記輔助育種選擇提供依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：ADRA1B PPARGC1B 時(shí)空表達(dá) 關(guān)聯(lián)分析 卵泡發(fā)育
【學(xué)位授予單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S831
【目錄】：

• 摘要2-4
• Abstract4-7
• 第一篇 文獻(xiàn)綜述7-14
• 1.1 發(fā)育特點(diǎn)7-8
• 1.2 調(diào)控機(jī)制8-10
• 1.3 候選基因研究進(jìn)展10-12
• 1.4 研究的目的及意義12-14
• 第二篇 研究?jī)?nèi)容14-43
• 第一章 雞ADRA1B和PPARGC1B基因m RNA在不同等級(jí)卵泡中的表達(dá)特性分析14-24
• 1.1 材料與方法14-18
• 1.2 結(jié)果與分析18-22
• 1.3 討論22-23
• 1.4 小結(jié)23-24
• 第二章 雞卵巢中ADRA1B基因和PPARGC1B基因蛋白質(zhì)表達(dá)分析24-29
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料及方法24-26
• 2.2 結(jié)果26-27
• 2.3 討論27-28
• 2.4 小結(jié)28-29
• 第三章 雞ADRA1B和PPARGC1B基因單核苷酸多態(tài)性與產(chǎn)蛋性狀關(guān)聯(lián)分析29-43
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料及方法29-34
• 3.2 結(jié)果與分析34-40
• 3.3 討論40-42
• 3.4 小結(jié)42-43
• 結(jié)論43-44
• 參考文獻(xiàn)44-50
• 作者簡(jiǎn)介50-51
• 致謝51

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：649625