本文關(guān)鍵詞：FSH及WNT信號通路對綿羊卵泡顆粒細胞功能的影響

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【摘要】：Wnt信號通路普遍存在于哺乳動物體內(nèi),至今已發(fā)現(xiàn)3條主要的Wnt信號通路,可調(diào)控多種發(fā)生過程。研究發(fā)現(xiàn)Wnt信號通路在神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育,組織、器官發(fā)育以及腫瘤的發(fā)生過程中都存在重要作用,此外,Wnt信號通路與卵泡的發(fā)育也存在密切的聯(lián)系。而IWR-1是Wnt/β-catenin經(jīng)典信號通路的一種抑制劑,它可以改變多蛋白復合體的穩(wěn)定性,最終起到抑制該經(jīng)典信號通路的作用。雖然對Wnt的研究已經(jīng)很廣泛,但目前關(guān)于Wnt信號通路對綿羊卵泡顆粒細胞功能的影響以及該影響與FSH之間的相互作用還未見報道。為了進一步了解Wnt信號通路對綿羊卵泡顆粒細胞的調(diào)節(jié)機制,本研究選擇了通路中多個起主要作用的基因,檢測其在綿羊不同大小卵泡中的表達差異,初步了解Wnt信號通路在卵泡發(fā)育過程中的表達情況。隨后進行顆粒細胞的體外培養(yǎng),培養(yǎng)體系分為8種不同濃度：0 ng·mL~(-1) FSH、0 μmol·L~(-1) IWR-1; 0 ng·mL~(-1) FSH、0.1 μmol·L~(-1) IWR-1; 0ng·mL~(-1) FSH、1μmol·L~(-1) IWR-1; 0ng·mL~(-1) FSH、10μmol·L~(-1) IWR-1; 5 ng·mL~(-1) FSH、 0 μmol·L~(-1) IWR-1; 5 ng·mL~(-1) FSH、0.1μmol·L~(-1) IWR-1; 5 ng·mL~(-1) FSH.1 μmol·L~(-1) IWR-1; 5 ng·mL~(-1) FSH、10μmol·L~(-1) IWR-1.每個濃度6個重復,隔48 h換一次液,培養(yǎng)168 h后收集所培養(yǎng)的顆粒細胞及培養(yǎng)液。利用Guava ViaCount(?) Reagent測定細胞數(shù)目的變化,利用綿羊ELISA試劑盒檢測雌激素的濃度,通過qRT-PCR檢測FSH靶基因CYP19和CCND2的相對表達量差異。試驗結(jié)果如下：1.CTNNB1在大卵泡中表述相對較多(P0.05),FZD6在大、中卵泡中表達拼相對較多(P0.05),DVL1在不同大小卵泡中的表達量無明顯差異,AXIN2在中、小卵泡中表達量相對較多(P0.05)。綜上所述,隨著綿羊卵泡的增大,Wnt信號通路在卵泡中的表達也基本呈現(xiàn)出遞增趨勢,因此Wnt信號通路可能促進綿羊卵泡的發(fā)育。2.當未添加最適濃度的FSH時,0.1 μmol·L~(-1)和1 μmol·L~(-1)的IWR-1使顆粒細胞數(shù)目顯著減少(P0.05)；當培養(yǎng)基中存在最適濃度的FSH時,不同濃度IWR-1的作用均使顆粒細胞數(shù)目減少且更加顯著。對于雌激素濃度,只有當FSH存在時,抑制劑IWR-1的添加才能導致雌激素濃度顯著降低(P0.05)。因此,當IWR-1的濃度為1 μmol·L~(-1)時,對顆粒細胞的抑制效果最明顯,且這種作用與FSH的存在有關(guān)。3.Wnt信號通路抑制劑IWR-1使綿羊卵泡顆粒細胞中FSH的靶基因CYP19 mRNA和CCND2 mRNA的相對表達量降低。本研究結(jié)果支持Wnt信號通路對綿羊卵泡顆粒細胞的生物學功能具有促進作用,并且這種促進作用與FSH有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：綿羊 卵泡 顆粒細胞 Wnt信號通路 IWR-1 FSH
【學位授予單位】：山西農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S826
【目錄】：

• 摘要7-9
• 第一章 文獻綜述9-21
• 1 哺乳動物卵泡的發(fā)生9-14
• 1.1 哺乳動物原始卵泡庫的形成和發(fā)育9
• 1.2 卵泡發(fā)育9-11
• 1.3 卵泡發(fā)育的調(diào)控機制11
• 1.4 發(fā)情周期卵泡的調(diào)節(jié)機制11-14
• 2 顆粒細胞及其在卵泡發(fā)育中的功能14-15
• 2.1 顆粒細胞14
• 2.2 顆粒細胞對卵泡發(fā)育的影響14-15
• 3 卵泡顆粒細胞體外培養(yǎng)15-16
• 3.1 顆粒細胞體外培養(yǎng)的重要性15
• 3.2 顆粒細胞體外培養(yǎng)體系15-16
• 3.3 外源FSH對體外培養(yǎng)的顆粒細胞的影響16
• 4 Wnt信號通路研究進展16-20
• 4.1 Wnt的發(fā)現(xiàn)及其信號通路16-17
• 4.2 經(jīng)典Wnt/β-catenin信號通路17-18
• 4.3 Wnt信號通路功能的研究18-20
• 5 本研究的目的和意義20-21
• 第二章 WNT信號通路關(guān)鍵基因在綿羊大、中、小卵泡顆粒細胞中的表達21-30
• 1 材料與方法21-26
• 1.1 試驗材料21-22
• 1.2 主要試驗儀器及試劑22-23
• 1.3 試驗方法23-26
• 2 結(jié)果與分析26-28
• 2.1 PCR擴增電泳結(jié)果26-27
• 2.2 CTNNB1、FZD6、DVL1、AXIN2、β-Actin的擴增曲線和熔解曲線27
• 2.3 CTNNB1、FZD6、DVL1、AXIN2在不同大小卵泡中的表達差異27-28
• 3 討論28-29
• 4 小結(jié)29-30
• 第三章 WNT信號通路的阻斷對綿羊卵泡顆粒細胞功能的影響30-42
• 1 試驗材料與方法30-34
• 1.1 試驗動物30
• 1.2 主要試驗試劑及儀器30-33
• 1.3 試驗方法33-34
• 2 試驗結(jié)果與分析34-40
• 2.1 添加不同濃度FSH和IWR-1的培養(yǎng)體系中顆粒細胞的生長狀況34-36
• 2.2 不同濃度FSH和IWR-1的處理下對顆粒細胞增殖的影響36-37
• 2.3 不同濃度FSH和IWR-1的處理對顆粒細胞雌激素分泌的影響37
• 2.4 IWR-1抑制Wnt信號通路作用的證明37-38
• 2.5 不同濃度FSH和IWR-1的處理下FSH靶基因的表達差異38-40
• 3 討論40-41
• 4 小結(jié)41-42
• 全文結(jié)論42-43
• 參考文獻43-47
• 特色與創(chuàng)新47-49
• 在讀期間發(fā)表論文49-51
• Abstract51-53
• 附錄53-55
• 致謝55

【參考文獻】

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本文編號：639640