本文關(guān)鍵詞：CIDEC互作蛋白的篩選與分析

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【摘要】：豬肉品質(zhì)是豬的重要經(jīng)濟性狀,也是豬的性能測定中的一重要指標。隨著人們生活水平的提高,豬的肉質(zhì)性狀也從剛開始一味追求瘦肉率到現(xiàn)在更注重肉質(zhì)品質(zhì)。肌內(nèi)脂肪含量是影響肉質(zhì)的一個極其重要的指標,肝臟脂肪代謝的能力影響其沉積水平。誘導(dǎo)細胞凋亡FF45樣效應(yīng)因子C(Cell death-inducing DFF45-like effector c, cidec),在鼠中稱為脂肪特異性因子(Fat-specific protein of 27kD, FSP27)與脂肪沉積相關(guān),在脂肪代謝中起著重要作用。由于豬CIDEC與小鼠的CIDEC有高度的同源性(82.8%),本研究第一階段先以小鼠為研究對象,采用RT-PCR, Co-IP,質(zhì)譜分析等方法,篩選在禁食、高脂對照條件下的肝臟以及對照條件下的脂肪中CIDEC的互作蛋白。獲得如下結(jié)果：1.在脂肪沉積(高脂喂養(yǎng))和脂肪動員(禁食處理)這一對相反的進程中,肝臟CIDEC的表達量與甘油三酯(TG)的含量均顯著上升,因此推測CIDEC可能是在脂肪沉積和動員中的關(guān)鍵因子。2.利用Co-IP技術(shù)捕獲CIDEC在高脂,禁食,對照的肝臟和對照的脂肪組織中的互作蛋白。并進行質(zhì)譜篩選,通過DAVID網(wǎng)站對互作蛋白進行蛋白功能,亞細胞定位,GO, KEGG功能及其富集度等方面的分析。發(fā)現(xiàn)在不同營養(yǎng)和不同組織條件下,CIDEC發(fā)生轉(zhuǎn)位。本研究第二階段以巴馬豬為實驗對象,試圖驗證CIDEC互作蛋白在豬中是否成立。根據(jù)質(zhì)譜分析的結(jié)果,挑選出八個差異顯著的互作蛋白并構(gòu)建表達載體,為下一步采用酵母雙雜交方法驗證做準備。
【關(guān)鍵詞】：豬肉品質(zhì) 脂肪沉積 CIDEC 互作蛋白 質(zhì)譜
【學位授予單位】：廣西大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S828
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-11
• 縮略語表11-13
• 第一章 前言13-24
• 1.1 豬肉質(zhì)性狀概述13-14
• 1.1.1 研究豬肉質(zhì)性狀的意義13
• 1.1.2 研究豬種的優(yōu)勢13
• 1.1.3 肉質(zhì)性狀的判定標準13-14
• 1.1.4 影響豬肉質(zhì)性狀的因素14
• 1.2 Fsp27簡介14-19
• 1.2.1 cidec/Fsp27的發(fā)現(xiàn)及同源性分析14-16
• 1.2.2 cidec/Fsp27參與脂滴的形成與發(fā)展16-17
• 1.2.3 cidec/Fsp27家族蛋白在脂肪代謝中的功能17-18
• 1.2.4 cidec/Fsp27在肝臟中的功能18-19
• 1.3 免疫共沉淀19-20
• 1.4 質(zhì)譜介紹與數(shù)據(jù)分析20-21
• 1.4.1 質(zhì)譜介紹20
• 1.4.2 基因注釋分析20-21
• 1.4.3 基因集功能富集分析21
• 1.5 酵母雙雜交載體的構(gòu)建21-22
• 1.6 研究的目的和意義22-24
• 第二章 材料與方法24-45
• 2.1 實驗材料24
• 2.1.1 實驗動物飼喂及采樣24
• 2.1.2 載體與菌株24
• 2.2 主要儀器、試劑和溶液的配制方法24-28
• 2.2.1 主要儀器及廠家24-26
• 2.2.2 主要試劑26
• 2.2.3 主要溶液的配制方法26-28
• 2.3 實驗方法28-45
• 2.3.1 實時定量PCR28-30
• 2.3.2 試劑盒使用30-31
• 2.3.3 免疫共沉淀31-32
• 2.3.4 聚丙烯凝膠電泳32-33
• 2.3.5 銀染33-34
• 2.3.6 質(zhì)譜分析34
• 2.3.7 載體構(gòu)建的引物設(shè)計34-35
• 2.3.8 PCR擴增體系35-36
• 2.3.9 瓊脂糖凝膠電泳檢測36-37
• 2.3.10 PCR目的產(chǎn)物的回收與純化37
• 2.3.11 平末端PCR產(chǎn)物3’端加“A”尾37-38
• 2.3.12 目的片段與T載體的連接38
• 2.3.13 大腸桿菌DH5α感受態(tài)的制備與轉(zhuǎn)化38-39
• 2.3.14 重組質(zhì)粒的篩選與鑒定39
• 2.3.15 重組質(zhì)粒的抽提39-40
• 2.3.16 重組質(zhì)粒的雙酶切40-43
• 2.3.17 目的片段與表達載體連接43-44
• 2.3.18 生物分析相關(guān)軟件或網(wǎng)站44-45
• 第三章 結(jié)果與分析45-66
• 3.1 小鼠的飼喂情況45
• 3.2 禁食與高脂情況對肝臟和脂肪組織cidec表達量的影響45-46
• 3.3 禁食與高脂情況下對肝臟TG(Triglyceride)含量的影響46-47
• 3.4 免疫共沉淀獲取CIDEC互作蛋白47-49
• 3.5 質(zhì)譜結(jié)果分析49-63
• 3.5.1 同一組織不同營養(yǎng)狀態(tài)下CIDEC互作蛋白的分析49-59
• 3.5.2 不同組織在同一營養(yǎng)狀態(tài)下CIDEC互作蛋白分析59-63
• 3.6 載體的構(gòu)建63-66
• 第四章 討論與展望66-69
• 4.1 討論66-68
• 4.2 展望68-69
• 參考文獻69-74
• 致謝74-75
• 攻讀學位期間發(fā)表論文情況75

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本文編號：581713