本文關(guān)鍵詞：IBV雙抗體夾心ELISA檢測(cè)方法的建立及免疫膠體金試紙條的研制

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【摘要】：本試驗(yàn)用辣根過(guò)氧化物酶(Horseradish Peroxidase,HRP)對(duì)單克隆抗體11C10進(jìn)行標(biāo)記,將單克隆抗體2D6包被于酶標(biāo)板上,建立了用抗體2D6和11C10夾心檢測(cè)雞傳染性支氣管炎病毒(Infectious Bronchitis Virus, IBV)的酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)方法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA),并對(duì)建立的ELISA方法中各步反應(yīng)的條件進(jìn)行了優(yōu)化。通過(guò)驗(yàn)證結(jié)果顯示,建立的雙抗體夾心ELISA檢測(cè)方法檢測(cè)雞傳染性支氣管炎病毒時(shí)檢測(cè)結(jié)果呈陽(yáng)性而在檢測(cè)其他雞的傳染病病毒時(shí)結(jié)果呈陰性;將雞傳染性支氣管炎病毒尿囊液稀釋160倍后,建立的雙抗體夾心ELISA檢測(cè)方法仍能夠檢測(cè)得到。運(yùn)用雙抗體夾心的原理,制備了粒徑為25nm的膠體金溶液,用膠體金溶液標(biāo)記純化過(guò)的單克隆抗體11C10后將其吸附于玻璃纖維膜上作為金標(biāo)墊;將單克隆抗體2D6和羊抗鼠二抗印跡于層析膜上做檢測(cè)線(xiàn)和質(zhì)控線(xiàn)：將金標(biāo)墊、層析膜和吸水紙等按順序組裝研制了檢測(cè)雞傳染性支氣管炎病毒的膠體金免疫層析快速檢測(cè)試紙條。并對(duì)試紙條制備過(guò)程中金標(biāo)抗體稀釋液、金標(biāo)抗體稀釋度、包被抗體稀釋度和羊抗鼠二抗稀釋度等條件進(jìn)行了優(yōu)化,初步研制出能夠快速檢測(cè)雞傳染性支氣管炎病毒的試紙條,試紙條能夠檢測(cè)稀釋80倍后的病毒尿囊液且檢測(cè)其他病毒結(jié)果呈陰性。用研制的試紙條和雙抗體夾心ELISA方法同時(shí)檢測(cè)55份疑似感染IB的雞口咽拭子樣品,結(jié)果表明,雞傳染性支氣管炎病毒免疫膠體金診斷試紙條檢測(cè)結(jié)果與雙抗體夾心ELISA檢測(cè)結(jié)果符合率較高達(dá)到92.73%,具有操作方便并且現(xiàn)場(chǎng)結(jié)果顯示快速的優(yōu)點(diǎn),在IBV的臨床快速檢測(cè)方面具有重要意義。
【關(guān)鍵詞】：雞傳染性支氣管炎 ELISA 膠體金
【學(xué)位授予單位】：山西農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：S852.4
【目錄】：

• 摘要7-8
• 前言8-17
• 1 傳染性支氣管炎概述8-13
• 1.1 病原學(xué)8-9
• 1.2 IBV基因組結(jié)構(gòu)特征9
• 1.3 IBV的結(jié)構(gòu)蛋白及生物學(xué)功能9-11
• 1.4 IB的臨床癥狀分型及其剖檢變化11-12
• 1.5 IB的診斷12-13
• 2 免疫膠體金技術(shù)13-17
• 2.1 膠體金概述13-14
• 2.2 免疫膠體金概述14
• 2.3 免疫膠體金檢測(cè)技術(shù)14-17
• 第一章 IBV雙抗體夾心ELISA檢測(cè)方法的建立17-26
• 1 材料與方法17-20
• 1.1 材料、儀器及主要試劑17-18
• 1.2 試驗(yàn)方法18-20
• 2 結(jié)果與分析20-24
• 2.1 IBV抗原的制備20-21
• 2.2 抗體的純化21
• 2.3 雙抗體夾心ELISA最佳操作條件的優(yōu)化21-22
• 2.4 臨界值的確定22-23
• 2.5 ELISA重復(fù)性、敏感性、特異性的確定23-24
• 3 討論24-25
• 3.1 樣本的影響24
• 3.2 材料、試劑的影響24
• 3.3 加樣24
• 3.4 洗板24-25
• 3.5 溫育25
• 3.6 顯色與結(jié)果判定25
• 4 小結(jié)25-26
• 第二章 IBV膠體金免疫檢測(cè)試紙條的研制26-39
• 1 材料與方法26-32
• 1.1 材料與試劑26
• 1.2 試驗(yàn)方法26-32
• 2 試驗(yàn)結(jié)果32-36
• 2.1 膠體金的制備32
• 2.2 膠體金標(biāo)記抗體32-33
• 2.3 金標(biāo)墊的制備33
• 2.4 硝酸纖維膜上單抗和二抗包被濃度的優(yōu)化33-34
• 2.5 膠體金免疫層析試紙條性能評(píng)價(jià)34-36
• 2.6 膠體金試紙條與雙抗體夾心ELISA檢測(cè)方法檢測(cè)臨床樣品的比較36
• 3 討論36-38
• 3.1 膠體金的制備36-37
• 3.2 抗體的標(biāo)記37
• 3.3 金標(biāo)墊的制備37
• 3.4 試紙條與其他方法的比較37-38
• 3.5 試紙條的應(yīng)用38
• 4 小結(jié)38-39
• 結(jié)論39-40
• 參考文獻(xiàn)40-44
• Abstract44-46
• 致謝46

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本文編號(hào)：581850