本文關(guān)鍵詞：副豬嗜血桿菌Hfq基因缺失株的構(gòu)建與鑒定，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：為構(gòu)建副豬嗜血桿菌Hfq基因缺失株,以副豬嗜血桿菌S2261基因組為模板擴增Hfq基因的上、下游同源臂,用融合PCR的方法融合拼接兩條同源臂。以Eco RⅠ+HindⅢ分別對融合片段與p K18mobSac B質(zhì)粒進行雙酶切并用T4 DNA連接酶連接以構(gòu)建同源重組質(zhì)粒p K18mob Sac B-Hfq-ud。以大腸桿菌S17-1-pir作為供體菌,副豬嗜血桿菌S2261作為受體菌,通過接合轉(zhuǎn)移法成功構(gòu)建了副豬嗜血桿菌Hfq基因缺失株。繪制了S2261野生株與Hfq缺失株的生長曲線以及測定了LD50,結(jié)果顯示,相比于S2261野生株,Hfq缺失株在對數(shù)期的生長速度下降;S2261野生株與Hfq缺失株的LD50分別為2.9×108與3.16×1010CFU,這說明相比野生株,Hfq缺失株導致小鼠半數(shù)死亡所需的劑量顯著升高,相對的其毒力則明顯下降。藥敏試驗結(jié)果顯示,Hfq缺失株對氧氟沙星和諾氟沙星的敏感性明顯增加。以上結(jié)果說明在副豬嗜血桿菌中,Hfq基因?qū)υ摼纳L速度、毒力以及藥物敏感性具有調(diào)控作用。這為副豬嗜血桿菌Hfq基因功能以及該菌相關(guān)的疫苗研究奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 四川農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學院;動物疫病與人類健康四川省重點實驗室;
【關(guān)鍵詞】： 副豬嗜血桿菌 Hfq基因 基因缺失 接合轉(zhuǎn)移
【基金】：“十二五”國家科技支撐計劃項目(2013BAD12B04)
【分類號】：S852.61
【正文快照】： 引物名稱Primer names引物序列(5'→3')Primer sequencs酶切位點Restriction site目的片段的大小/bpLengthHfqu-F CGGAATTCCGAGCGGATCAACCCTAATGAT Eco RⅠ545Hfqu-R CGGGGACCATGCTCTCTGAGCTTTATGTTCCTTCTAATTHfqd-F GCTCAGAGAGCATGGTCCCCGTTTTATTACTACGTTAGACCT514Hfqd-R CCC

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