本文關(guān)鍵詞：腸炎沙門氏菌誘導(dǎo)雞卵巢免疫反應(yīng)的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：雞的生殖道末端開口于泄殖腔,因此易受泄殖腔處排泄物和環(huán)境中病原微生物感染,從而引起生殖功能異常以及雞蛋的污染。腸炎沙門氏菌(Salmonella enteritidis,SE)作為禽類養(yǎng)殖業(yè)中主要的病原體,不僅會(huì)對(duì)禽類腸道進(jìn)行感染,同時(shí)也可以入侵雞的生殖道引發(fā)生殖道疾病。同時(shí)SE作為人類食源性疾病的主要病原菌可以通過(guò)感染雞蛋或雞肉等食物從而威脅人類健康。卵泡的生長(zhǎng)發(fā)育會(huì)直接影響雞的產(chǎn)蛋性能和雞蛋的品質(zhì),而卵巢不但作為卵泡生長(zhǎng)和發(fā)育場(chǎng)所,還會(huì)對(duì)蛋雞感染SE后的抵抗起著至關(guān)重要作用。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)兩種方式(口服和泄殖腔注射SE)對(duì)45周齡蛋雞接種SE,隨后通過(guò)HE染色方法、SP免疫組化法和SYBR Green I實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測(cè)蛋雞接種SE后1d、4d、7d、10d和14d時(shí)卵巢組織發(fā)育變化情況以及卵巢內(nèi)CD3、CD4、CD8和Bu-1+淋巴細(xì)胞分布變化及數(shù)量動(dòng)態(tài)變化和卵巢內(nèi)TLR3、TLR4、TLR7、TLR21、IL-6和iNOS mRNA表達(dá)動(dòng)態(tài)變化情況。通過(guò)HE染色技術(shù)檢測(cè)到口服SE組蛋雞卵巢間質(zhì)和卵泡膜上白細(xì)胞數(shù)量會(huì)增多,而泄殖腔注射SE組蛋雞卵巢內(nèi)除了有間質(zhì)和卵泡膜白細(xì)胞增多外,還會(huì)出現(xiàn)血管充血或出血現(xiàn)象。SP免疫組化實(shí)驗(yàn)檢測(cè)到口服SE組蛋雞卵巢內(nèi)CD3+細(xì)胞在1-14d時(shí)數(shù)量逐漸增多直到14d達(dá)最高峰,且每個(gè)日齡都高于對(duì)照組,陽(yáng)性細(xì)胞主要分布于卵巢間質(zhì)。泄殖腔注射SE組蛋雞卵巢內(nèi)CD3+細(xì)胞在1-10d時(shí)數(shù)量越來(lái)越多,10d達(dá)最大值且此時(shí)期極顯著高于對(duì)照組。CD4+T淋巴細(xì)胞在數(shù)量變化上并沒(méi)有太大幅度的改變,口服SE組蛋雞接種SE后10d數(shù)量達(dá)最高峰,而泄殖腔注射SE組蛋雞接種SE后4d時(shí)數(shù)量就到達(dá)最高峰,少量陽(yáng)性細(xì)胞分布于卵巢間質(zhì)和髓質(zhì)內(nèi)。兩個(gè)實(shí)驗(yàn)組內(nèi)CD8+T淋巴細(xì)胞數(shù)量均是在10d達(dá)到最大值,且這種細(xì)胞主要分布于卵泡膜和間質(zhì)中,同時(shí)也會(huì)在髓質(zhì)內(nèi)也分布,只是陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量并沒(méi)有卵泡膜和間質(zhì)中陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量多。Bu-1+淋巴細(xì)胞與T淋巴細(xì)胞相比從接種后1-14d其數(shù)量一直都較少,但相比于對(duì)照組,實(shí)驗(yàn)組蛋雞卵巢內(nèi)Bu-1+淋巴細(xì)胞幾乎都會(huì)高于對(duì)照組。通過(guò)SYBR Green I實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測(cè)到口服SE組蛋雞卵巢內(nèi)TLR3 mRNA相對(duì)表達(dá)量在10d達(dá)最大值且顯著高于對(duì)照組;TLR4、TLR21和IL-6 mRNA相對(duì)表達(dá)量在7d達(dá)最大值,但只有IL-6 mRNA含量在7d時(shí)顯著高于對(duì)照組;TLR7 mRNA表達(dá)量與對(duì)照組差異不顯著。泄殖腔注射SE組蛋雞卵巢內(nèi)TLR3 mRNA的相對(duì)表達(dá)量在4d時(shí)達(dá)最大值,隨后逐漸減少至14d時(shí)表達(dá)量又進(jìn)一步增多,TLR7和IL-6 mRNA的表達(dá)在10d時(shí)達(dá)最高峰且都顯著高于對(duì)照組,TLR4和TLR21 mRNA表達(dá)變化差異不顯著,iNOS mRNA的表達(dá)量與口服SE組類似,只有在接種后的第1d表達(dá)量最多隨后減少,與對(duì)照組相比差異不顯著。以上結(jié)果表明,分別通過(guò)口服和泄殖腔注射方式對(duì)蛋雞接種SE,口服和泄殖腔注射SE均可引起蛋雞卵巢組織結(jié)構(gòu)發(fā)生變化,同時(shí)引起卵巢內(nèi)T和B淋巴細(xì)胞分布和數(shù)量發(fā)生改變,但是與Bu-1+細(xì)胞相比,CD3、CD4和CD8陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量要明顯更多,說(shuō)明接種SE引起蛋雞卵巢產(chǎn)生的免疫反應(yīng)更傾向于細(xì)胞免疫應(yīng)答。接種方式的不同可以引起天然免疫因子mRNA含量和淋巴細(xì)胞數(shù)量及分布情況不同,證明接種方式對(duì)免疫效果有一定的影響,相比于口服SE泄殖腔注射SE效果要更為明顯。兩個(gè)實(shí)驗(yàn)組蛋雞卵巢內(nèi)都會(huì)有天然免疫細(xì)胞因子mRNA的表達(dá)量增加,證明SE可誘導(dǎo)蛋雞卵巢產(chǎn)生天然免疫應(yīng)答,但是兩個(gè)實(shí)驗(yàn)組內(nèi)TLRs mRNA的表達(dá)變化情況不同,相比于口服SE組,泄殖腔注射組卵巢內(nèi)TLRs mRNA表達(dá)量相對(duì)較高。
【關(guān)鍵詞】：蛋雞 卵巢 SE 細(xì)胞因子 淋巴細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S858.31
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-9
• 第一章 前言9-16
• 1.1 研究目的與意義9-10
• 1.2 文獻(xiàn)綜述10-16
• 第二章 蛋雞接種SE后卵巢組織結(jié)構(gòu)觀察16-22
• 2.1 材料和方法16-18
• 2.2 結(jié)果與分析18-21
• 2.3 討論21
• 2.4 小結(jié)21-22
• 第三章 蛋雞接種SE后卵巢內(nèi)T淋巴細(xì)胞和Bu-1+淋巴細(xì)胞變化檢測(cè)22-35
• 3.1 材料和方法22-23
• 3.2 結(jié)果與分析23-32
• 3.3 討論32-33
• 3.4 小結(jié)33-35
• 第四章 蛋雞接種SE后卵巢中細(xì)胞因子表達(dá)的檢測(cè)35-49
• 4.1 材料和方法35-39
• 4.2 結(jié)果與分析39-46
• 4.3 討論46-48
• 4.4 小結(jié)48-49
• 結(jié)論49-50
• 參考文獻(xiàn)50-57
• 附錄57-58
• 作者簡(jiǎn)介58-59
• 致謝59

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