本文關(guān)鍵詞：禽坦布蘇病毒TaqMan實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測方法的建立，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：【目的】建立禽坦布蘇病毒(Avian Tembusu virus,ATmV)TaqMan實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測方法�！痉椒ā扛鶕�(jù)ATmV非結(jié)構(gòu)蛋白NS1的基因特征,設(shè)計(jì)特異性的引物和探針,建立基于TaqMan探針檢測ATmV的實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測方法,對其特異性、重復(fù)性進(jìn)行檢測。用建立的TaqMan實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測方法和之前建立的RT-PCR方法同時(shí)對臨床15份疑似ATmV感染的病料進(jìn)行檢測,計(jì)算其符合率。【結(jié)果】成功建立了檢測ATmV的實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測方法,當(dāng)NS1基因含量為(2.67×102)~(2.67×107)拷貝/μL時(shí)有良好的線性擴(kuò)增,其擴(kuò)增相關(guān)系數(shù)為0.998,擴(kuò)增效率為99.9%。建立的ATmV實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測方法敏感度高,最低檢測限為2.67×102拷貝/μL;特異性強(qiáng),對水禽常見病毒(如Ⅰ型鴨肝炎病毒、新型鴨呼腸孤病毒、禽流感病毒、禽Ⅰ型副粘病毒與番鴨細(xì)小病毒等)檢測均為陰性;重復(fù)性好,組內(nèi)變異系數(shù)和組間變異系數(shù)分別為0.39%~1.17%和0.51%~1.82%。對臨床送檢的15份病料,TaqMan實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測方法的陽性率為73.33%(11/15),RTPCR方法的陽性率為60.0%(9/15),2種方法的符合率為100.0%�！窘Y(jié)論】建立了基于TaqMan探針的ATmV實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測方法,該方法可應(yīng)用于ATmV感染的早期檢測。
【作者單位】： 福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所福建省畜禽疫病防治工程技術(shù)研究中心;
【關(guān)鍵詞】： 禽坦布蘇病毒 NS基因 TaqMan 實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法
【基金】：國家現(xiàn)代水禽產(chǎn)業(yè)體系項(xiàng)目(CARS-43) 福建省屬公益類項(xiàng)目(2015R1023-7) 福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院“青年科技英才百人計(jì)劃”項(xiàng)目(YC2015-12);福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院青年人才創(chuàng)新基金項(xiàng)目(2014QA-7)
【分類號(hào)】：S852.65
【正文快照】： 自2010年春季以來,我國南方種(蛋)鴨養(yǎng)殖廠發(fā)生一種以產(chǎn)蛋率急劇下降甚至停產(chǎn)為典型特征的鴨新發(fā)傳染病,臨床剖檢病變主要為卵巢發(fā)育不良,卵泡變性、出血或破裂。該病在不同地區(qū)、不同品種鴨群發(fā)病率高低不一,群內(nèi)發(fā)病率幾乎為100%,病死率為0~12%。國內(nèi)多家科研單位開展聯(lián)合攻

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本文編號(hào)：487314