本文關(guān)鍵詞：miR-122和miR-449a在草原紅牛睪丸組織不同發(fā)育階段的表達(dá)規(guī)律及其功能，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：本研究以中國草原紅牛為研究對象,采用實時熒光定量PCR方法檢測了miR-122、miR-185、miR-146b、miR-140、miR-449a、miR-204、miR-375、miR-221在草原紅牛不同發(fā)育時期睪丸組織和以及其他組織中的表達(dá)差異,篩選出在睪丸中特異表達(dá)或傾向表達(dá)的miRNA,并通過預(yù)測軟件對選擇對miRNA進(jìn)行靶基因預(yù)測,構(gòu)建雙熒光素酶報告載體。初步闡明這8個miRNAs調(diào)控睪丸發(fā)育的分子機(jī)制,為中國草原紅牛公牛發(fā)育的遺傳機(jī)理和在肉牛生產(chǎn)中進(jìn)行分子育種提供了理論基礎(chǔ)。本研究主要結(jié)果如下:通過對miR-122、miR-185、miR-146b、miR-140、miR-449a、miR-204、miR-375、miR-221草原紅牛不同組織中相對表達(dá)量水平分析,它們在各組織中有不同程度的表達(dá),其中mir-122和mir-449a在草原紅牛睪丸中相對表達(dá)量較高,miR-122、miR-449a在睪丸中具有傾向性表達(dá)的特點,而且miR-122在睪丸中的表達(dá)量與其它組織相比差異極其顯著。這8個miRNA在在不同發(fā)育階段牛睪丸組織中的相對表達(dá)量差異顯著,miR-221和miR-204在初生牛中相對表達(dá)量最高,miR-140和miR-185在12月齡睪丸中表達(dá)量最高,miR-449a、miR-375、miR-146b和miR-122在24月齡睪丸中相對表達(dá)量最高。這8個miRNA的熒光定量結(jié)果與課題組前期出生公牛和24月齡公牛solexa高通量測序結(jié)果一致,miR-146b、miR-449a、miR-375和miR-122表達(dá)上調(diào),miR-185、miR—140、miR-204和miR-221表達(dá)下調(diào)。通過軟件預(yù)測miR-122可能的靶基因有MAF1、PDK4、DUSP4、FUT8、PRKRA,miR-449a可能的靶基因FKBP1B,3'UTR區(qū)進(jìn)行擴(kuò)增,插入到PGL3-control載體構(gòu)建構(gòu)建雙熒光素酶報告載體,與pre-mir共同轉(zhuǎn)入牛脂肪細(xì)胞中,通過多功能酶標(biāo)儀檢測熒光素酶活性。結(jié)果驗證,DUSP4和FKBP1B可能分別是是miR-122和miR-449a的靶基因。本研究分析了miRNAs在不同發(fā)育階段睪丸組織及其他組織中的表達(dá)差異,預(yù)測了睪丸組織中高表達(dá)mir-122和mir-449a的靶基因,并進(jìn)行了體外驗證,為以后研究miRNA對肉牛生殖器官的發(fā)育及生殖活動的調(diào)控機(jī)理具有重要作用。
【關(guān)鍵詞】：草原紅牛 睪丸組織 miR-122 miR-449a DUSP4 FKBP1B
【學(xué)位授予單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S823
【目錄】：

• 摘要3-4
• Abstract4-8
• 第一篇 文獻(xiàn)綜述8-17
• 第一章 miRNA的研究進(jìn)展概述8-14
• 1.1 miRNA概述8
• 1.2 miRNA生物合成8-9
• 1.3 miRNA的作用機(jī)制9
• 1.4 miRNA的表達(dá)檢測9-12
• 1.5 miRNA靶基因的預(yù)測12-13
• 1.6 miRNA靶基因的驗證13-14
• 第二章 雄性哺乳動物的繁殖機(jī)制14-17
• 2.1 精子發(fā)生過程14
• 2.2 miRNAs與精子發(fā)生的關(guān)系14-15
• 2.3 睪丸組織中miRNAs的表達(dá)15-16
• 2.4 本研究的目的和意義16-17
• 第二篇 研究內(nèi)容17-46
• 第一章 材料與方法17-29
• 1.1. 實驗材料17-19
• 1.2. 試驗方法19-29
• 第二章 結(jié)果29-41
• 2.1 mi RNAs在不同組織中的表達(dá)規(guī)律分析29-31
• 2.2 mi RNAs在不同發(fā)育階段牛睪丸中表達(dá)規(guī)律分析31-35
• 2.3 miR-122和miR-449a的靶基因驗證35-41
• 第三章 討論41-46
• 3.1 生物信息對miRNA靶基因的預(yù)測41
• 3.2 關(guān)于本實驗靶基因的預(yù)測41
• 3.3 miR-122和miR-449a在牛睪丸組織中的調(diào)控靶基因的機(jī)制41-43
• 3.4 miR-122調(diào)控睪丸組織的功能43
• 3.5 miR-449a調(diào)控睪丸組織的功能43-44
• 3.6 關(guān)于引物的設(shè)計44
• 3.7 關(guān)于載體構(gòu)建44-45
• 3.8 不足之處45-46
• 結(jié)論46-47
• 參考文獻(xiàn)47-52
• 作者簡介52-53
• 致謝53

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本文編號：464774