本文關(guān)鍵詞：萊菔硫烷對鎘暴露小鼠睪丸支持細(xì)胞保護機制的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景與目的：鎘污染嚴(yán)重威脅著人類和動植物的健康,鎘(Cd)慢性中毒已成為影響家畜繁殖障礙的重要原因之一,其誘導(dǎo)睪丸細(xì)胞凋亡的主要原因是產(chǎn)生活性氧(ROS),從而引起細(xì)胞膜的脂質(zhì)過氧化損傷。Nrf2抗氧化反應(yīng)的信號可以由抗氧化劑化合物萊菔硫烷(SFN)誘導(dǎo)。本試驗旨在研究萊菔硫烷能否通過Nrf2-ARE通路來保護鎘造成的小鼠睪丸支持細(xì)胞的損傷,無疑為對抗鎘導(dǎo)致的生殖細(xì)胞的氧化損傷的治療提供了新思路,為臨床防治鎘中毒疾病提供理論參考。方法：用不同濃度的SFN和CdCl2單獨或聯(lián)合處理小鼠睪丸支持細(xì)胞,MTT法檢測其存活率；比色法檢測其MDA含量及LDH、SOD活性；AO/EB雙染色法和流式細(xì)胞術(shù)檢測其凋亡率；qPCR和Western blot方法分別檢測其Nrf2及其調(diào)控的GSH-PX、HO-1、γ-GCS、 NQO1基因mRNA和蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果：1. CdCl2可降低細(xì)胞的存活率,低濃度的SFN能使細(xì)胞的存活率升高；2. CdCl2使細(xì)胞的LDH活性上升p0.01)、SOD活性降低p0.05)、MDA含量升高(P0.05),SFN能使染CdCl2細(xì)胞的LDH活性降低p0.01)、SOD活性升高(P0.01)、MDA含量明顯下降p0.01)；3.CdCl2誘發(fā)睪丸支持細(xì)胞凋亡率顯著增加(P0.01),SFN能抑制CdCl2誘導(dǎo)的支持細(xì)胞的凋亡p0.01)；4. CdCl2降低NrF2及其調(diào)控的下游靶基因的mRNA和蛋白的表達(dá)水平p0.01,p0.05),SFN提高了CdCl2處理的睪丸支持細(xì)胞Nrf2及其調(diào)控的下游靶基因的mRNA和蛋白的表達(dá)量p0.01,p0.05)。結(jié)論：萊菔硫烷對鎘暴露導(dǎo)致的細(xì)胞氧化損傷、凋亡具有保護作用；能通過激活Nrf2-ARE路徑,上調(diào)其下游的抗氧化和解毒酶的表達(dá)水平來拮抗鎘對細(xì)胞造成的損傷。
【關(guān)鍵詞】：氯化鎘 萊菔硫烷 支持細(xì)胞 Nrf2-ARE通路
【學(xué)位授予單位】：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S859.7
【目錄】：

• 摘要10-11
• Abstract11-12
• 前言12-18
• 1 鎘的概述12-14
• 1.1 鎘的生殖毒性作用的研究12-13
• 1.2 鎘拮抗劑的研究現(xiàn)狀13-14
• 2 萊菔硫烷14-15
• 2.1 抗腫瘤作用14
• 2.2 保護腦和神經(jīng)的作用14-15
• 2.3 抗氧化作用15
• 2.4 免疫抗炎作用15
• 3 Nrf2-Keap1/ARE信號通路15-17
• 3.1 轉(zhuǎn)錄因子核相關(guān)因子E2相關(guān)因子2(Nrf2)簡介及相關(guān)作用16
• 3.2 Kelch樣環(huán)氧氯丙烷相關(guān)蛋白1(Keap1)簡介及相關(guān)作用16-17
• 4 本試驗的目的與意義17-18
• 試驗一 小鼠原代睪丸支持細(xì)胞體外培養(yǎng)模型的建立18-26
• 1 試驗材料18-19
• 1.1 試驗動物18
• 1.2 主要器材18
• 1.3 主要試劑及配制18-19
• 2 試驗方法19-21
• 2.1 小鼠睪丸支持細(xì)胞的分離、培養(yǎng)和純化19-20
• 2.2 小鼠睪丸支持細(xì)胞的鑒定20-21
• 2.2.1 油紅O染色鑒定20
• 2.2.2 Feulgen染色鑒定20
• 2.2.3 FasL免疫組化鑒定20-21
• 3 結(jié)果與分析21-24
• 3.1 支持細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察21-22
• 3.2 油紅O染色鑒定結(jié)果22
• 3.3 Feulgen染色鑒定結(jié)果22-23
• 3.4 FasL免疫組化鑒定結(jié)果23-24
• 4 討論24-25
• 5 小結(jié)25-26
• 試驗二 萊菔硫烷對染鎘小鼠睪丸支持細(xì)胞的保護作用及機制的研究26-59
• 1 試驗材料26-30
• 1.1 試驗動物26
• 1.2 主要器材26-27
• 1.3 主要試劑及配制27-30
• 2 試驗方法30-41
• 2.1 氯化鎘染毒和萊菔硫烷解毒模型的建立30-31
• 2.2 支持細(xì)胞活性的檢測31
• 2.3 支持細(xì)胞凋亡的檢測31-32
• 2.4 支持細(xì)胞氧化損傷的檢測32-33
• 2.5 支持細(xì)胞Nrf2、GSH-PX、HO-1、γ-GCS及NQO1基因mRNA的表達(dá)水平檢測33-38
• 2.6 支持細(xì)胞Nrf2、GSH-PX、HO-1、γ-GCS、NQO1蛋白表達(dá)水平的檢測38-41
• 2.7 數(shù)據(jù)的統(tǒng)計與分析41
• 3 結(jié)果與分析41-55
• 3.1 氯化鎘和萊菔硫烷處理的支持細(xì)胞存活率的檢測結(jié)果41-46
• 3.2 支持細(xì)胞活性檢測結(jié)果46
• 3.3 支持細(xì)胞凋亡檢測結(jié)果46-49
• 3.4 支持細(xì)胞氧化損傷的檢測結(jié)果49
• 3.5 GSH-PX、Nrf2、HO-1、γ-GCS、NQO1及內(nèi)參引物的特異性檢測結(jié)果49-50
• 3.6 支持細(xì)胞Nrf2、GSH-PX、HO-1、γ-GCS、NQO1及內(nèi)參基因qPCR引物的特異性及標(biāo)準(zhǔn)曲線的結(jié)果分析50
• 3.7 支持細(xì)胞Nrf2、GSH-PX、HO-1、γ-GCS及NQO1 mRNA和蛋白表達(dá)水平50-55
• 4 討論55-58
• 5 小結(jié)58-59
• 結(jié)論59-60
• 參考文獻(xiàn)60-67
• 附錄67-74
• 致謝74-75
• 攻讀碩士研究生期間發(fā)表的文章75

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3 孫秀娟;韓輝;;動物支持細(xì)胞的研究進(jìn)展[J];當(dāng)代畜牧;2011年11期

4 夏凡,李青旺,韓增勝,陳曉宇,龍玲;成年兔睪丸支持細(xì)胞的分離純化[J];中國農(nóng)學(xué)通報;2005年05期

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6 吳仲恒;莊瑞宏;張盈盈;陳義洲;;犬支持細(xì)胞瘤引起雙側(cè)睪丸多發(fā)性囊腫一例[J];廣東畜牧獸醫(yī)科技;2009年01期

7 張明;鄔靜;袁慧;鄧思君;袁莉蕓;郭成志;朱麗;;鎘誘導(dǎo)仔豬睪丸支持細(xì)胞氧化酶活性降低及DNA的損傷[J];中國獸醫(yī)學(xué)報;2010年06期

8 劉輝;田惠萍;崔定中;成正邦;夏洛浚;;牦牛、黃牛、犏牛的垂體、間質(zhì)細(xì)胞和支持細(xì)胞的比較[J];中國牦牛;1990年03期

9 張靜;周智慧;鄒海軍;王杏龍;;成年公兔睪丸支持細(xì)胞的分離純化及鑒定[J];中國畜牧獸醫(yī);2007年05期

10 劉闖;趙曉娥;馬保華;孫冰潔;;新生犢牛睪丸支持細(xì)胞的高效分離培養(yǎng)與鑒定[J];西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2010年01期

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1 陳小玉;;睪丸支持細(xì)胞功能研究進(jìn)展[A];中國環(huán)境誘變劑學(xué)會致癌專業(yè)委員會09年學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2009年

2 葉世雋;陳詠梅;;支持細(xì)胞中微絲對精子發(fā)生調(diào)控的研究[A];中國動物學(xué)會全國顯微與亞顯微形態(tài)科學(xué)（細(xì)胞及分子顯微技術(shù)科學(xué)）分會第十一次學(xué)術(shù)研討會論文摘要集[C];2002年

3 采克俊;張易祥;丁海雷;丁志麗;張念慈;劉莉;;18天雞胚睪丸支持細(xì)胞的分離純化與鑒定[A];中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會第九次會員代表大會暨青年學(xué)術(shù)大會論文摘要集[C];2007年

4 鄭明華;林海龍;陳永平;;睪丸支持細(xì)胞與移植[A];2008年浙江省感染病、肝病學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2008年

5 吳應(yīng)積;羅奮華;旭日干;;絨山羊睪丸支持細(xì)胞與生殖細(xì)胞的長期培養(yǎng)和觀察[A];第十屆全國生殖生物學(xué)學(xué)術(shù)研討會論文摘要集[C];2005年

6 周莉;吳純啟;馬華智;廖明陽;;羥基脲對大鼠Sertoli-germ細(xì)胞共培養(yǎng)的影響[A];2006年全國藥物毒理學(xué)會議論文集[C];2006年

7 周銀濤;王鮮忠;周玉蘭;趙伯川;陳永軍;張家驊;;仔豬睪丸組織在出生后早期細(xì)胞增殖能力變化[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會獸醫(yī)產(chǎn)科學(xué)分會第五屆全體會議第十次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2009年

8 孔慶學(xué);江紅;段翠密;李洪波;吳靖芳;韓曉明;王常勇;;微重力條件下胰島與睪丸支持細(xì)胞共培養(yǎng)的實驗研究[A];提高全民科學(xué)素質(zhì)、建設(shè)創(chuàng)新型國家——2006中國科協(xié)年會論文集（下冊）[C];2006年

9 鄭明華;林海龍;陳永平;;睪丸支持細(xì)胞與移植[A];第十次浙江省中西醫(yī)結(jié)合肝病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2008年

10 米美玲;鄒挺;楊蓓;熊明娣;王晶磊;徐斯凡;;睪丸支持細(xì)胞與大鼠海馬細(xì)胞培養(yǎng)作用的初步研究[A];Proceedings of the 7th Biennial Meeting and the 5th Congress of the Chinese Society for Neuroscience[C];2007年

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1 李天舒;干細(xì)胞功能下降可致人類衰老[N];健康報;2007年

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6 汪秀星;兒童時期腮腺炎病毒感染導(dǎo)致成年男性不育與支持細(xì)胞的蛋白質(zhì)異戊二烯化修飾的改變相關(guān)[D];南京大學(xué);2013年

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8 張順;MTA2在睪丸支持細(xì)胞中的表達(dá)及功能研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2013年

9 張明;鎘誘導(dǎo)仔豬睪丸支持細(xì)胞凋亡及機理研究[D];湖南農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

10 李潔;雄性小鼠睪丸支持細(xì)胞中Attractin的功能研究[D];華中科技大學(xué);2009年

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1 劉歡歡;視黃醇對仔豬睪丸支持細(xì)胞體外生物學(xué)特性的影響[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

2 王雪;萊菔硫烷對鎘暴露小鼠睪丸支持細(xì)胞保護機制的研究[D];沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

3 鮑自強;自噬在溫和型熱應(yīng)激誘導(dǎo)仔豬睪丸支持細(xì)胞乳酸生成中的作用[D];西南大學(xué);2016年

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5 張連杰;氟對睪丸支持細(xì)胞免疫豁免功能的影響及其機制研究[D];山西農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

6 武海軍;犢牛睪丸支持細(xì)胞的分離培養(yǎng)及其對淋巴細(xì)胞的影響[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2007年

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本文編號：464621