本文關(guān)鍵詞：ANKRD23與長非編碼RNA-AK004293對肌細胞分化相關(guān)基因的表達調(diào)控，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：肌纖維形成是一個復(fù)雜過程,受到多種蛋白編碼基因和非編碼RNA的精細調(diào)控。在本實驗室前期研究結(jié)果基礎(chǔ)上,我們獲得了一個在骨骼肌高表達的lncRNA-AK004293,該lncRNA與ANKRD23基因3’UTR重疊。本研究利用RNA干擾技術(shù)和超表達技術(shù)在C2C12成肌細胞中研究了lncRNA-AK004293對ANKRD23表達的影響,以及這兩個基因?qū)〖毎只嚓P(guān)基因表達的影響。主要研究結(jié)果如下:1.采用實時定量PCR、Western blotting技術(shù)檢測了超表達和干涉AK004293基因后肌細胞分化相關(guān)基因MyoD、MyoG和MyHC的表達變化及ANKRD23的表達變化;發(fā)現(xiàn)了AK004293對肌細胞分化相關(guān)基因與ANKRD23的表達都沒有顯著影響。2.采用實時定量PCR、Western blotting技術(shù)檢測了超表達和干涉ANKRD23基因后肌細胞分化相關(guān)基因MyoD、MyoG和MyHC的表達變化;發(fā)現(xiàn)干涉ANKRD23后增強了MyoD、MyoG和MyHC的表達,超表達ANKRD23后減弱了上述基因的表達,表明ANKRD23對肌細胞分化有負調(diào)節(jié)作用。本研究結(jié)果為進一步研究肌細胞中ANKRD23的功能及其調(diào)控機制奠定了基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：長非編碼RNA ANKRD23 成肌細胞分化 RNAi 超表達
【學位授予單位】：華中農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S852.2
【目錄】：

• 摘要7-8
• Abstract8-9
• 縮略詞表9-10
• 第一章 文獻綜述10-22
• 1 骨骼肌形成的分子調(diào)控機制10-12
• 1.1 骨骼肌發(fā)育相關(guān)的基因家族10
• 1.2 骨骼肌形成的上游調(diào)控因子—Pax家族10-11
• 1.3 MicroRNA在骨骼肌發(fā)育中的功能11-12
• 2 LncRNA的功能及作用機制12-19
• 2.1 LncRNAs的功能12-14
• 2.1.1 調(diào)控等位基因的表達：X染色體失活12
• 2.1.2 調(diào)控等位基因的表達：基因印記12-13
• 2.1.3 在發(fā)育中的作用13-14
• 2.1.4 在癌癥中的作用14
• 2.2 LncRNA的作用機制14-19
• 2.2.1 增強子RNA與染色質(zhì)成環(huán)15-16
• 2.2.2 印記基因中的lncRNA16-17
• 2.2.3 LncRNA的劑量補償效應(yīng)17
• 2.2.4 反義lncRNA轉(zhuǎn)錄抑制基因表達17-18
• 2.2.5 LncRNA的自調(diào)控18-19
• 3 MARP家族中ANKRD23的研究進展19-22
• 第二章 目的意義22-23
• 第三章 材料和方法23-40
• 1 實驗材料23-28
• 1.1 實驗樣品23
• 1.2 主要儀器和設(shè)備23-24
• 1.3 主要試劑與試劑盒24-25
• 1.4 試劑配制25-26
• 1.5 應(yīng)用的生物信息學網(wǎng)站及分析軟件26-27
• 1.6 載體27-28
• 2 試驗方法28-40
• 2.1 細胞培養(yǎng)28-29
• 2.1.1 細胞的復(fù)蘇28
• 2.1.2 C2C12細胞的增殖培養(yǎng)28
• 2.1.3 C2C12細胞的分化培養(yǎng)28-29
• 2.1.4 細胞的凍存29
• 2.2 C2C12細胞總RNA的提取和cDNA的制備29-30
• 2.3 AK004293超表達載體的構(gòu)建30-34
• 2.3.1 小鼠AK004293 cDNA的克隆30-32
• 2.3.2 瓊脂糖凝膠電泳和成像32
• 2.3.3 PCR產(chǎn)物的膠回收和克隆測序32-34
• 2.3.4 質(zhì)粒提取34
• 2.3.5 pcDNA3.1-AK004293真核表達載體的酶切鑒定34
• 2.4 ANKRD23超表達載體的構(gòu)建34-35
• 2.5 AK004293-siRNA干涉片段的選取35
• 2.6 脂質(zhì)體介導(dǎo)的細胞轉(zhuǎn)染(6 孔板)35-36
• 2.7 Quantitative real-time PCR分析36-37
• 2.8 Western blotting分析37-40
• 2.8.1 蛋白提取37
• 2.8.2 BCA蛋白濃度測定37
• 2.8.3 SDS-PAGE電泳37-38
• 2.8.4 轉(zhuǎn)膜38
• 2.8.5 封閉38
• 2.8.6 免疫反應(yīng)38
• 2.8.7 ECL化學發(fā)光檢測38-40
• 第四章 結(jié)果與分析40-49
• 1 ANKRD23與AK004293在成肌細胞分化過程中的表達變化40-41
• 1.1 RNA水平的表達變化40
• 1.2 蛋白水平的表達變化40-41
• 2 AK004293的干擾片段篩選41-42
• 3 siRNA對AK004293基因的干擾效果及其對肌細胞分化標志基因表達的影響42-43
• 4 pcDNA3.1-AK004293載體構(gòu)建及其對肌細胞分化標志基因表達的影響43-45
• 4.1 AK004293超表達載體的鑒定43
• 4.2 超表達AK004293后肌細胞分化標志基因表達量的變化43-45
• 5 siRNA對ANKRD23基因的干擾效果及及其對肌細胞分化標志基因表達的影響45-47
• 6 pcDNA3.1-ANKRD23載體構(gòu)建及其對肌細胞分化標志基因表達的影響47-49
• 6.1 ANKRD23超表達載體的鑒定47
• 6.2 超表達ANKRD23后肌細胞分化標志基因表達量的變化47-49
• 第五章 討論49-52
• 1 關(guān)于ANKRD23及與其 3’ UTR重疊的lncRNA AK004293之間的關(guān)系49-50
• 2 關(guān)于RNAi技術(shù)50
• 3 關(guān)于干擾和超表達ANKRD23對成肌細胞分化的影響50-51
• 4 下一步計劃51-52
• 小結(jié)52-53
• 參考文獻53-60
• 致謝60

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