本文關鍵詞：STMN2對海蘭褐殼蛋雞卵巢顆粒細胞Ras-MAPK信號通路的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：STMN2(微管去穩(wěn)蛋白2)是一種在細胞核中表達的微管蛋白。STMN2的主要作用是通過促進微管的解聚或阻止微管的聚合從而影響有絲分裂紡錘體的形成。有文獻指出,高產(chǎn)蛋雞產(chǎn)蛋期腦垂體STMN2表達量顯著高于休產(chǎn)期腦垂體STMN2表達量。Ras-MAPK信號途徑是細胞內(nèi)重要的信號通路之一,其參與了多種生理過程的調(diào)節(jié),對動物的繁殖有重要作用。實驗前期通過查閱文獻,可知在禽類顆粒細胞中,STMN2的表達顯著升高,推測STMN2可通過Ras-MAPK信號途徑調(diào)控細胞有絲分裂。因此,通過研究STMN2表達量對顆粒細胞Ras-MAPK信號通路關鍵因子erk1(細胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶1)、erk2(細胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶2)、ras(大鼠肉瘤蛋白)、elk-1(轉(zhuǎn)錄激活因子ETS樣蛋白1)mRNA表達量和蛋白表達量,及Ras-MAPK信號通路抑制或激活時STMN2 mRNA表達量和蛋白表達量,探討STMN2與Ras-MAPK信號途徑的相互關系,為提高海蘭褐殼蛋雞產(chǎn)蛋量,提供一種理論依據(jù)。本實驗選取健康8月齡產(chǎn)蛋期雌性海蘭褐殼蛋雞,原代培養(yǎng)海蘭褐殼蛋雞卵泡顆粒細胞,STMN2過表達腺病毒載體轉(zhuǎn)染原代培養(yǎng)的顆粒細胞,實驗分為對照組、空載體組、STMN2過表達組;STMN2低表達載體轉(zhuǎn)染原代培養(yǎng)的顆粒細胞,實驗分為STMN2低表達組、空載體組、對照組。選用熒光定量PCR和Western blot檢測過表達和低表達各組Ras-MAPK信號通路中關鍵因子mRNA和蛋白水平表達的影響;顆粒細胞原代培養(yǎng),加入Ras-MAPK信號通路激活劑和抑制劑,實驗分為激活劑組、抑制劑組、對照組,選用熒光定量PCR和Western blot檢測STMN2 mRNA和蛋白表達量。結(jié)果如下:(1)STMN2過表達對顆粒細胞中Ras-MAPK信號通路關鍵因子的影響與腺病毒空載體組和對照組相比,STMN2過表達組中erk1、erk2和ras mRNA表達水平均極顯著升高(p0.01),elk-1 mRNA表達水平差異顯著升高(p0.05);STMN2過表達組中除elk-1蛋白表達水平差異不顯著(p0.05)外erk1、erk2、p-erk1、p-erk2和ras蛋白表達水平極顯著升高(p0.01)。(2)STMN2低表達對顆粒細胞中Ras-MAPK信號通路關鍵因子的影響與空載體組和對照組相比,STMN2低表達組中erk1、elk-1 mRNA表達水平極顯著降低(p0.01),ras和erk2 mRNA表達水平差異顯著降低(p0.05);蛋白表達水平均顯著降低(p0.05)。(3)Ras-MAPK信號通路對STMN2表達量的影響與激活劑和對照組相比,抑制劑組中STMN2 mRNA和蛋白表達水平顯著降低(p0.05);與抑制劑和對照組組相比,激活劑組中STMN2 mRNA和蛋白表達水平顯著升高(p0.05)。結(jié)果表明:STMN2與Ras-MAPK信號通路相互調(diào)節(jié)。提示STMN2可通過Ras-MAPK信號通路對卵泡顆粒細胞進行調(diào)控,進而促進顆粒細胞的生長、發(fā)育,促進排卵。
【關鍵詞】：STMN2 蛋雞顆粒細胞 Ras-MAPK
【學位授予單位】：黑龍江八一農(nóng)墾大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S831
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 中英文縮寫表 110-11
• 中英文縮寫表 211-12
• 第一章 文獻綜述12-16
• 1.1 顆粒細胞12
• 1.2 STMN212-13
• 1.3 MAPK信號通路13-15
• 1.4 本研究的目的意義15-16
• 第二章 STMN2過表達對顆粒細胞Ras-MAPK信號通路的影響16-32
• 2.1 材料方法16-24
• 2.1.1 實驗材料16-17
• 2.1.2 方法17-24
• 2.2 結(jié)果24-29
• 2.2.1 STMN2過表達腺病毒轉(zhuǎn)染原代培養(yǎng)顆粒細胞24
• 2.2.2 總RNA質(zhì)量檢測24-25
• 2.2.3 熒光定量RCR檢測STMN2 mRNA表達結(jié)果25-26
• 2.2.4 Western blot檢測STMN2蛋白表達結(jié)果26
• 2.2.5 目的基因引物特異性檢測結(jié)果26
• 2.2.6 Ras-MAPK信號通路關鍵因子mRNA表達結(jié)果26-27
• 2.2.7 Ras-MAPK信號通路關鍵因子蛋白表達結(jié)果27-29
• 2.3 討論29-30
• 2.3.1 STMN2過表達載體腺病毒轉(zhuǎn)染原代培養(yǎng)蛋雞卵泡顆粒細胞模型的構(gòu)建29
• 2.3.2 STMN2過表達對Ras-MAPK信號通路的影響29-30
• 2.4 小結(jié)30-32
• 第三章 STMN2低表達對顆粒細胞Ras-MAPK信號通路的影響32-40
• 3.1 材料方法32-33
• 3.1.1 材料32
• 3.1.2 方法32-33
• 3.2 結(jié)果33-38
• 3.2.1 sh-RNA干擾STMN2表達載體轉(zhuǎn)染原代培養(yǎng)顆粒細胞結(jié)果33-34
• 3.2.2 總RNA質(zhì)量檢測34
• 3.2.3 熒光定量檢測STMN2 mRNA表達結(jié)果34-35
• 3.2.4 Western blot檢測STMN2蛋白表達35
• 3.2.5 Ras-MAPK信號通路關鍵因子mRNA表達結(jié)果35-36
• 3.2.6 Western blot檢測信號通路關鍵因子蛋白表達水平36-38
• 3.3 討論38-39
• 3.3.1 載體選擇38
• 3.3.2 通路與卵泡發(fā)育38-39
• 3.4 小結(jié)39-40
• 第四章 Ras-MAPK信號改變對顆粒細胞STMN2表達的影響40-44
• 4.1 材料與方法40-41
• 4.1.1 主要儀器和設備40
• 4.1.2 方法40-41
• 4.2 結(jié)果41-42
• 4.2.1 相對熒光定量PCR檢測STMN2 mRNA表達水平41
• 4.2.2 Western blot檢測STMN2蛋白表達結(jié)果41-42
• 4.3 討論42-43
• 4.3.1 藥品濃度42
• 4.3.2 顆粒細胞STMN2蛋白表達42-43
• 4.4 小結(jié)43-44
• 第五章 結(jié)論44-46
• 參考文獻46-52
• 致謝52-54
• 附錄54-58
• 作者簡歷58

【參考文獻】

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  本文關鍵詞：STMN2對海蘭褐殼蛋雞卵巢顆粒細胞Ras-MAPK信號通路的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：406972