發(fā)布時間：2025-04-27 03:58

　　牛胚胎程序化冷凍已廣泛應用于生產(chǎn)當中,冷凍程序較統(tǒng)一,技術相對成熟。玻璃化冷凍是繼程序化冷凍之后發(fā)明的一種簡單高效的冷凍方法,細胞無需經(jīng)歷緩慢的程序化降溫過程,在玻璃化液中短暫處理后直接投入液氮冷凍即可。該方法不需要昂貴的程序化冷凍儀,操作省時,節(jié)約資金。牛胚胎玻璃化冷凍雖有大量的研究報道,但冷凍方案多種多樣,極不統(tǒng)一,較大程度上限制了該方法的推廣。首先,解凍程序不統(tǒng)一,研究者對分步解凍與一步解凍各執(zhí)己見,沒有提出明了的解析,讓生產(chǎn)者無從參考：其次,細胞在玻璃化液中的處理時間不確定,預處理時間從1min至20min均有報道,玻璃化液中的處理時間從30s至3min均有采用。處理時間范圍如此寬泛,不便于生產(chǎn)者參考。牛卵母細胞是研究抗凍保護劑滲透的理想半透膜模型,本研究以MII期牛卵母細胞為模型,從原理上分析了抗凍保護劑的添加與脫除之間的關系,以及處理時間與胞內(nèi)抗凍保護劑濃度的關系。并將結論用于優(yōu)化牛囊胚兩步法玻璃化冷凍和管內(nèi)解凍,以期簡化和統(tǒng)一牛胚胎玻璃化冷凍方法,為指導生產(chǎn)提供依據(jù)。 實驗結果表明： (1)用蔗糖濃度較高的玻璃化液處理牛卵母細胞后可采用較低濃度的蔗糖溶液甚至DP...

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語表
第一部分 文獻綜述
    第一章 哺乳動物卵母細胞和胚胎冷凍保存研究進展
        1. 超低溫冷凍保存原理
        2. 胚胎的冷凍保存
        3. 卵母細胞的冷凍保存
        4. 影響冷凍保存的因素
    第二章 牛胚胎兩步法玻璃化冷凍管內(nèi)解凍方法的研究進展
        1. 慢速冷凍管內(nèi)解凍研究進展
        2. 玻璃化冷凍管內(nèi)解凍研究進展
        3. 存在問題與展望
第二部分 實驗研究
    第三章 抗凍保護劑添加、脫除與細胞的滲透壓耐受性研究
        摘要
        1. 引言
        2. 材料方法
        3. 實驗結果
        4. 討論
    第四章 牛卵母細胞在EG中的處理時間與胞內(nèi)CPA濃度之間的關系
        摘要
        1. 引言
        2. 材料方法
        3. 實驗結果
        4 討論
    第五章 牛囊胚兩步法玻璃化冷凍管內(nèi)解凍方法的優(yōu)化
        摘要
        1 引言
        2. 材料方法
        3. 實驗結果
        4 討論
結論
前景與展望
    1. 采用干冰進行長期玻璃化冷凍保存的思路
    2. 混合型抗凍保護劑的優(yōu)越性
    3. 采用超純水配制預處理液或許能達到更好的滲透效果
參考文獻
致謝
作者簡歷



本文編號：4041841