發(fā)布時(shí)間：2025-04-18 02:18

　　狂犬病是最古老的傳染病之一,全世界每年約有55000人死于狂犬病�？袢《緦儆趶棤畈《究�,基因組從3’到5’端依次編碼五個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白(核蛋白、磷酸蛋白、基質(zhì)蛋白、糖蛋白和依賴RNA的RNA聚合酶)。糖蛋白是病毒粒子表面唯一的糖基化結(jié)構(gòu)蛋白,與宿主細(xì)胞表面受體結(jié)合導(dǎo)致細(xì)胞膜融合促進(jìn)病毒入侵細(xì)胞,也是誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生中和抗體的主要抗原。臨床上80%的狂犬病患者檢測不到中和抗體。研究表明實(shí)驗(yàn)室毒株刺激機(jī)體產(chǎn)生中和抗體,而野毒株不能,導(dǎo)致這種差異的機(jī)制尚未揭曉。有研究報(bào)道,實(shí)驗(yàn)室毒株激活的機(jī)體先天性免疫反應(yīng)與病毒糖蛋白表達(dá)正相關(guān),而野毒株狂犬病毒逃避機(jī)體先天免疫識(shí)別。先天性免疫反應(yīng)不僅可以直接殺傷病毒還可以誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生特異性抗病毒免疫反應(yīng)。樹突狀細(xì)胞是體內(nèi)廣泛分布的功能最強(qiáng)大的抗原遞呈細(xì)胞,其在機(jī)體先天性和特異性免疫反應(yīng)中起著重要作用。有研究表明狂犬病毒實(shí)驗(yàn)室毒株通過IPS-1通路激活樹突狀細(xì)胞,狂犬病毒先導(dǎo)RNA可以激活人腎細(xì)胞IPS-1信號(hào)通路。以上報(bào)道均是以實(shí)驗(yàn)室毒株狂犬病毒為研究對象。本實(shí)驗(yàn)旨在研究野毒株狂犬病毒通過樹突狀細(xì)胞逃避免疫識(shí)別的機(jī)制。以狂犬病毒在體外刺激的樹突狀細(xì)胞移植的嵌合體小鼠...

【文章頁數(shù)】：122 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語表(Abbreviation)
第1章 前言
    1.1. 狂犬病及其危害
    1.2. 狂犬病流行病學(xué)
    1.3. 狂犬病毒病原性特征
        1.3.1. 狂犬病毒的理化性質(zhì)
        1.3.2. 狂犬病毒的結(jié)構(gòu)
        1.3.3. 狂犬病毒分型
        1.3.4. 狂犬病毒基因組特點(diǎn)
        1.3.5. 狂犬病毒結(jié)構(gòu)蛋白
    1.4. 狂犬病毒感染細(xì)胞過程
        1.4.1 狂犬病毒結(jié)構(gòu)在感染過程中的作用
        1.4.2 狂犬病毒的細(xì)胞受體
        1.4.3 狂犬病毒潛在的細(xì)胞受體
        1.4.4 細(xì)胞內(nèi)吞與狂犬病毒
        1.4.5 狂犬病毒穿透細(xì)胞膜
        1.4.6 狂犬病毒的細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)
        1.4.7 狂犬病毒影響細(xì)胞功能促進(jìn)感染
        1.4.8 病毒的核轉(zhuǎn)移
    1.5. 細(xì)胞免疫與狂犬病毒感染
        1.5.1 模式識(shí)別受體與病毒感染
        1.5.2 C型凝集素受體與狂犬病毒
        1.5.3 干擾素信號(hào)通路與狂犬病毒
        1.5.4 細(xì)胞自噬與狂犬病毒
    1.6. 狂犬病毒與樹突狀細(xì)胞
        1.6.1 樹突狀細(xì)胞表面的病毒受體
        1.6.2 樹突狀細(xì)胞對T細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用
        1.6.3 病毒與樹突狀細(xì)胞的相互作用
        1.6.4 樹突狀細(xì)胞在狂犬病免疫中的作用
第2章 材料和方法
    2.1 材料
        2.1.1 毒株與細(xì)胞
        2.1.2 主要藥品及試劑
        2.1.3 培養(yǎng)基
        2.1.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    2.2 方法
        2.2.1 表達(dá)野毒株磷酸化蛋白或野毒株糖蛋白重組狂犬病毒構(gòu)建
        2.2.2 小鼠bmDCs的分離培養(yǎng)、純化及鑒定
        2.2.3 小鼠bmDCs回輸及攻毒保護(hù)性實(shí)驗(yàn)
        2.2.4 免疫電鏡定量分析狂犬病毒表面糖蛋白含量
        2.2.5 Western Blotting檢測病毒蛋白在細(xì)胞中的表達(dá)量
        2.2.6 相對熒光定量檢測細(xì)胞因子的相對表達(dá)水平
        2.2.7 絕對熒光定量檢測病毒vRNA、mRNA cRNA的轉(zhuǎn)錄水平
        2.2.8 絕對熒光定量檢測病毒Leader RNA的轉(zhuǎn)錄水平
        2.2.9 共聚焦顯微鏡檢測細(xì)胞融合
        2.2.10 脂質(zhì)體熒光染色檢測細(xì)胞融合
        2.2.11 細(xì)胞熒光轉(zhuǎn)化灶單位(Fluorescence focus units,FFU)實(shí)驗(yàn)滴定狂犬病毒
        2.2.12 熒光抗體病毒中和試驗(yàn)方法檢測狂犬病毒中和抗體
        2.2.13 抗原刺激樹突狀細(xì)胞及免疫保護(hù)試驗(yàn)
        2.2.14 流式細(xì)胞術(shù)檢測體內(nèi)和體外免疫細(xì)胞表性變化
        2.2.15 T7體外轉(zhuǎn)錄RNA和RNA去磷酸化
        2.2.16 RNA轉(zhuǎn)染DCs
        2.2.17 糖蛋白亞病毒粒子體外分離
        2.2.18 體外轉(zhuǎn)錄翻譯合成蛋白質(zhì)
        2.2.19 免疫沉淀
第3章 結(jié)果與分析
    3.1 野毒株狂犬病毒逃避樹突狀細(xì)胞識(shí)別
        3.1.1 狂犬病毒滴定
        3.1.2 野毒株和實(shí)驗(yàn)室毒株狂犬病毒復(fù)制的差異
        3.1.3 狂犬病毒感染的樹突狀細(xì)胞后樹突狀細(xì)胞表型的變化
        3.1.4 狂犬病毒感染的樹突狀細(xì)胞的劑量依賴性檢測
        3.1.5 狂犬病毒感染的樹突狀細(xì)胞對細(xì)胞因子分泌的改變
        3.1.6 狂犬病毒刺激的樹突狀細(xì)胞回輸小鼠對免疫細(xì)胞分化的影響
        3.1.7 狂犬病毒刺激的樹突狀細(xì)胞回輸小鼠的狂犬病毒中和抗體水平
        3.1.8 狂犬病毒刺激的樹突狀細(xì)胞回輸小鼠的免疫保護(hù)實(shí)驗(yàn)
        3.1.9 狂犬病毒刺激的樹突狀細(xì)胞回輸小鼠對小鼠的致死率
        3.1.10 狂犬病毒未抑制樹突狀細(xì)胞的激活
    3.2 野毒株糖蛋白降低狂犬病毒感染DCs
        3.2.1 抗體親和力比較
        3.2.2 狂犬病毒野毒株糖蛋白降低病毒對DCs的吸附能力
        3.2.3 野毒株糖蛋白降低狂犬病毒對DCs入侵
        3.2.4 狂犬病毒野毒株糖蛋白降低了病毒與細(xì)胞膜的融合
        3.2.5 狂犬病毒吸附依賴DC表面蛋白受體
        3.2.6 狂犬病毒野毒株糖蛋白表達(dá)量低于實(shí)驗(yàn)室毒株
        3.2.7 野毒株病毒粒子表面糖蛋白少于弱毒株
    3.3 野毒株狂犬病毒抑制Leader RNA釋放
        3.3.1 細(xì)胞內(nèi)野毒株狂犬病毒LeaderRNA轉(zhuǎn)錄低于弱毒
        3.3.2 體外轉(zhuǎn)錄狂犬病毒Leader RNA 及Leader RNA二級(jí)結(jié)構(gòu)分析
        3.3.3 狂犬病毒LeaderRNA轉(zhuǎn)染激活DCs
        3.3.4 狂犬病毒依賴IPS-1信號(hào)通路激活樹突狀細(xì)胞
第4章 討論
    4.1 狂犬病毒野毒株逃避宿主DCs的識(shí)別
        4.1.1 樹突狀細(xì)胞在野毒株狂犬病毒免疫逃避中起關(guān)鍵作用
        4.1.2 T細(xì)胞和B細(xì)胞在野毒株狂犬病毒免疫逃避中的作用
        4.1.3 野毒株狂犬病毒糖蛋白在免疫逃避中的作用
        4.1.4 狂犬病毒誘導(dǎo)的樹突狀細(xì)胞激活取決于糖蛋白依賴的病毒RNA轉(zhuǎn)錄
    4.2 野毒株狂犬病毒限制糖蛋白表達(dá)的機(jī)制
        4.2.1 狂犬病毒糖蛋白抗體親和力比較
        4.2.2 野毒株與實(shí)驗(yàn)室毒株狂犬病毒糖蛋白序列比對分析
        4.2.3 野毒株狂犬病毒降低糖蛋白表達(dá)的三種假設(shè)
    4.3 以樹突狀細(xì)胞為載體的狂犬病細(xì)胞疫苗
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝



本文編號(hào)：4040366