畜牧業(yè)中β₂-激動劑的違禁使用問題一直是國內(nèi)外關(guān)注的熱點(diǎn),當(dāng)前雖然已經(jīng)基于β₂-激動劑的違禁使用建立了很多檢測方法,如儀器法、免疫法、傳感器法等,但是現(xiàn)有方法都是基于已知藥物。β₂-激動劑類藥物種類多、更新快,在畜牧生產(chǎn)中使用了新的β₂-激動劑類藥物,則上述已建立的方法檢測不出來,這些有問題的動物、畜產(chǎn)品將躲過監(jiān)管部門的監(jiān)測,進(jìn)入食物鏈,危害消費(fèi)者的健康。因此,有必要建立更為靈敏有效的方法,以實(shí)現(xiàn)對該家族藥物中逃逸藥物尤其是新藥的檢測。β₂-激動劑類藥物有著共同的作用機(jī)理,研究β₂-激動劑類藥物在分子水平對動物生理的影響,不僅可以發(fā)現(xiàn)同家族中已知的藥物,而且可以實(shí)現(xiàn)對新藥和逃逸藥物的監(jiān)測。在之前的研究中,我們已經(jīng)確立了一組轉(zhuǎn)錄水平的生物標(biāo)志物（mRNA）用于實(shí)驗(yàn)山羊中β₂-激動劑違禁使用的監(jiān)測。miRNA（microRNA）是真核生物中廣泛存在的一種長度為21-23nt的RNA分子,與mRNA相比更穩(wěn)定,且可以調(diào)控mRNA的表達(dá),更加靈...

【文章頁數(shù)】：95 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
abstract
主要符號對照表
第一章 引言
    1.1 背景
    1.2 β₂-激動劑及作用機(jī)理
    1.3 β₂-激動劑檢測技術(shù)
        1.3.1 儀器分析技術(shù)
            1.3.1.1 高效液相色譜法
            1.3.1.2 液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法
            1.3.1.3 氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法
            1.3.1.4 液相色譜飛行時間質(zhì)譜法
            1.3.1.5 電噴霧電離質(zhì)譜法
        1.3.2 免疫分析技術(shù)
            1.3.2.1 酶聯(lián)免疫法
            1.3.2.2 免疫層析試紙條法
        1.3.3 傳感器
            1.3.3.1 化學(xué)傳感器
            1.3.3.2 生物傳感器
    1.4 生物標(biāo)志物
        1.4.1 轉(zhuǎn)錄水平
            1.4.1.1 mRNA
            1.4.1.2 microRNA
            1.4.1.3 lncRNA
            1.4.1.4 Urine marker
        1.4.2 代謝水平
            1.4.2.1 光譜和色譜技術(shù)
            1.4.2.2 核磁共振(NMR)技術(shù)
            1.4.2.3 高分辨率色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)
        1.4.3 蛋白水平
    1.5 生物統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    1.6 研究意義和主要內(nèi)容
第二章 體外miRNA標(biāo)志物的篩選與驗(yàn)證
    2.1 前言
    2.2 材料和方法
        2.2.1 骨骼肌細(xì)胞提取及處理
        2.2.2 miRNA測序
        2.2.3 靶基因預(yù)測
        2.2.4 目的miRNA的選擇
        2.2.5 QRT-PCR反應(yīng)
        2.2.6 數(shù)據(jù)處理與分析
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 細(xì)胞鑒定結(jié)果
        2.3.2 miRNA測序結(jié)果
        2.3.3 miRNA的選擇及基因表達(dá)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建
        2.3.4 體外qRT-PCR驗(yàn)證結(jié)果
    2.4 討論
    2.5 本章小結(jié)
第三章 體內(nèi)miRNA標(biāo)志物的驗(yàn)證
    3.1 前言
    3.2 材料和方法
        3.2.1 動物實(shí)驗(yàn)
        3.2.2 目的miRNA的選擇
        3.2.3 QRT-PCR反應(yīng)
        3.2.4 數(shù)據(jù)處理與分析
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 體內(nèi)qRT-PCR驗(yàn)證結(jié)果
        3.3.2 羊尿液miRNA標(biāo)志物驗(yàn)證結(jié)果
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
第四章 β₂-激動劑相關(guān)miRNAs與 ADRB2 調(diào)控機(jī)制研究
    4.1 前言
    4.2 材料和方法
        4.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染
        4.2.2 qRT-PCR反應(yīng)
        4.2.3 雙熒光素酶分析
        4.2.4 數(shù)據(jù)處理和分析
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 轉(zhuǎn)染類似物及抑制劑結(jié)果
        4.3.2 雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.3.3 VIP分析結(jié)果
    4.4 討論
    4.5 結(jié)論
第五章 基于代謝組學(xué)的β₂-激動劑作用機(jī)理研究
    5.1 前言
    5.2 材料和方法
        5.2.1 細(xì)胞處理
        5.2.2 樣品前處理
        5.2.3 數(shù)據(jù)采集
        5.2.4 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    5.3 結(jié)果與分析
        5.3.1 方法學(xué)評價
        5.3.2 多元統(tǒng)計(jì)分析
        5.3.3 差異代謝物鑒定
        5.3.4 通路與機(jī)理分析
    5.4 討論
    5.5 小結(jié)
第六章 論文原創(chuàng)性
第七章 全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄 A
致謝
作者簡歷



本文編號：4039635