豬圓環(huán)病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)屬于圓環(huán)病毒科(Circoviridae)的圓環(huán)病毒屬(Circovirus)成員,為單股負(fù)鏈閉合環(huán)狀DNA病毒,基因組由1767～1768個核苷酸(nt)組成,病毒粒子為二十面體對稱結(jié)構(gòu)、無囊膜、直徑約為17 nm,是已知的感染哺乳動物的最小病毒。PCV2主要感染豬,造成感染豬的免疫系統(tǒng)損害和抑制,引起豬圓環(huán)病毒病(Porcine circovirus disease,PCVD),繼發(fā)或混合其他病原感染,給養(yǎng)豬業(yè)造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失,是目前危害養(yǎng)豬業(yè)最為嚴(yán)重的病原之一。對PCV2致病機理的闡明是更好防控其對養(yǎng)豬業(yè)危害的基礎(chǔ),病毒編碼產(chǎn)物功能的研究是揭示PCV2致病機理的重要方面。PCV2的基因組中包含多個潛在開放閱讀框(Open reading frame,ORF),目前已有6個ORFs的編碼產(chǎn)物被鑒定和進(jìn)行了功能研究。其中,ORF5是本研究團(tuán)隊鑒定的PCV2的一個新的編碼產(chǎn)物,研究發(fā)現(xiàn)ORF5蛋白具有引起宿主細(xì)胞周期阻滯、誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)和細(xì)胞自噬的作用。通過酵母雙雜交技術(shù)篩選到多個與ORF5可能存在相互...

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【學(xué)位級別】：碩士

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圖4-4流式細(xì)胞儀檢測PCV2感染YWHAB過表達(dá)及干擾細(xì)胞株后細(xì)胞凋亡水平

PCV2感染YWHAB過表達(dá)及干擾細(xì)胞株24h后,收取細(xì)胞樣品,用流式細(xì)胞儀檢測其凋亡率。結(jié)果如圖4-5所示,與對照細(xì)胞株(9.3%)及PK-15細(xì)胞(9.1%)相比,PCV2感染24h后的YWHAB過表達(dá)細(xì)胞株(4.5%)細(xì)胞凋亡率較低(a)。與對照細(xì)胞株(7.3%)及PK....

圖4-6 PCV2感染YWHAB過表達(dá)及干擾細(xì)胞株后細(xì)胞ROS水平檢測

PCV2感染YWHAB過表達(dá)及干擾細(xì)胞株24h后,收取細(xì)胞樣品,用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞內(nèi)ROS含量。結(jié)果如圖4-6所示,與PK-15細(xì)胞以及對照細(xì)胞株相比,YWHAB過表達(dá)細(xì)胞株極顯著降低了PCV2感染誘導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)ROS水平的增加(P<0.001)。YWHAB干擾細(xì)胞株極顯著增加....

圖1-1兩個正交視圖中14-3-3的結(jié)構(gòu)(HelicesαA-αI顯示為圓柱體)(Yaffe 2002)

14-3-3蛋白具有特異性磷酸絲氨酸/磷酸蘇氨酸結(jié)合活性,14-3-3二聚體可以與多種細(xì)胞蛋白相互作用,包括轉(zhuǎn)錄因子、生物合成酶、細(xì)胞骨架蛋白、信號分子、凋亡因子和腫瘤抑制因子等。14-3-3靶蛋白一般含有3個高親和性14-3-3結(jié)合基序:RSXpSXP(模式1),RXXXpSX....

圖2-1 YWHAB基因的PCR擴(kuò)增

PCR擴(kuò)增得到帶有不同酶切位點的大小約為741bp的YWHAB基因,結(jié)果如圖2-1。2.3.1.2載體及YWHAB基因的雙酶切

本文編號：4039055