發(fā)布時(shí)間：2024-12-10 02:24

　　目的：大熊貓?jiān)从谥袊?是世界上最稀有和受到最大生存威脅的哺乳動(dòng)物之一。隨著人類生存地域的擴(kuò)張,大熊貓的棲息地環(huán)境被破壞,對(duì)大熊貓圈養(yǎng)成為保護(hù)大熊貓和提高其繁殖率的必要措施。微生物是許多直接或間接影響動(dòng)物繁殖及相關(guān)疾病的原因。真菌作為陰道中微生物的重要組成,時(shí)常引發(fā)如念珠菌性陰道炎等疾病,也引起動(dòng)物流產(chǎn)、死胎等繁殖障礙。陰道內(nèi)真菌存在狀況越來越引起人們的關(guān)注和研究。為了科學(xué)保護(hù)大熊貓,提高大熊貓的繁殖率,弄清發(fā)情期大熊貓陰道內(nèi)可培養(yǎng)真菌的種類及對(duì)藥物的敏感性,為大熊貓的生殖道合理用藥提供參考。方法：通過對(duì)成都大熊貓繁育研究基地的10只發(fā)情期雌性大熊貓(成績(jī)、北川、蜀蘭、慶賀、婭仔、晶晶、大嬌、萌萌、婭雙、小丫頭)陰道分泌物進(jìn)行真菌分離培養(yǎng)、形態(tài)學(xué)鑒定；通過真菌ITS序列通用引物ITS1、ITS4對(duì)分離真菌進(jìn)行PCR擴(kuò)增、序列測(cè)定,再在NCBI BLAST比對(duì)其ITS序列基因相似性,提交其序列。并對(duì)各真菌進(jìn)行分析,找出對(duì)大熊貓陰道健康或生殖有威脅菌種。選取5種抗真菌藥(兩性霉素B、制霉菌素、酮康唑、氟康唑、伊曲康唑)通過丹麥Rosco紙片擴(kuò)散法對(duì)大熊貓發(fā)情期陰道分泌物中分離到的5種酵母菌：鏈...

【文章頁數(shù)】：88 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
英文縮寫詞表
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1. 真菌的概況
        1.1 真菌的定義
        1.2 真菌的分類學(xué)地位
        1.3 真菌的分類
            1.3.1 按形態(tài)學(xué)
            1.3.2 按可培養(yǎng)性
            1.3.3 按作用性
        1.4 真菌的鑒定方法
            1.4.1 傳統(tǒng)方法
                1.4.1.1 形態(tài)學(xué)鑒定法
                1.4.1.2 顯色培養(yǎng)基培養(yǎng)法
            1.4.2 分子生物學(xué)方法
                1.4.2.1 真菌DNA中DNA(G+C)mol%含量測(cè)定技術(shù)
                1.4.2.2 DNA分子雜交技術(shù)
                1.4.2.3 核糖體脫氧核糖核酸(rDNA)序列測(cè)定
                1.4.2.4 限制性片段多態(tài)性(RFLP)分析技術(shù)
                1.4.2.5 隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性(RAPD)分析技術(shù)
                1.4.2.6 擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性(AFLP)分析技術(shù)
            1.4.3 其他方法
        1.5 真菌對(duì)動(dòng)物的危害性
    2. 人陰道真菌的研究概況
    3. 動(dòng)物真菌的研究概況
    4. 大熊貓?jiān)凑婢芯扛艣r
    5. 真菌的耐藥性
    6. 結(jié)語
第二章 發(fā)情期大熊貓陰道可培養(yǎng)真菌的分離鑒定
    1. 材料與方法
        1.1 材料
            1.1.2 主要儀器
            1.1.3 主要試劑
            1.1.4 主要溶液的配制
            1.1.5 PCR引物
        1.2 方法
            1.2.1 采樣
            1.2.2 真菌的分離培養(yǎng)
            1.2.3 真菌的形態(tài)學(xué)鑒定
                1.2.3.1 菌落形態(tài)學(xué)觀察
                1.2.3.2 顯微鏡觀察
            1.2.4 真菌的rDNA序列分析
                1.2.4.1 真菌總DNA的提取
                1.2.4.2 PCR反應(yīng)
                1.2.4.3 電泳
            1.2.5 測(cè)序鑒定
    2 試驗(yàn)結(jié)果
        2.1 真菌的形態(tài)學(xué)
            2.1.1 互隔交鏈孢霉(Alternaria alternata)
            2.1.2 甘蔗節(jié)菱孢菌(Arthrinium sacchari)
            2.1.3 雜色曲霉(Aspergillus versicolor)
            2.1.4 菌核曲霉(Aspergillus sclerotiorum)
            2.1.5 子囊菌屬(Ascomycota sp.LCC38)
            2.1.6 黑曲霉(Aspergillus niger)
            2.1.7 出芽短梗霉菌(Aureobasidium pullulans)
            2.1.8 灰葡萄孢霉(Booyotinia fuckeliana)
            2.1.9 淡色生赤殼菌(Bionectria ochroleuca)
            2.1.10 煙管菌(Bjerkandera adusta)
            2.1.11 球毛殼菌(Chaetomium globosum)
            2.1.12 枝孢樣枝孢霉(Cladosporium cladosporioides)
            2.1.13 莖潰瘍病菌(Diaporthe melonis)
            2.1.14 黑附球菌(Epicoccum nigrum)
            2.1.15 層生鐮刀菌(Fusarium proliferatum)
            2.1.16 馬爾尼菲青霉菌(Penicillium marneffe)
            2.1.17 粉質(zhì)擬青霉(Paecilomyces farinosus)
            2.1.18 指狀青霉(Penicillium digitatum)
            2.1.19 假小尾孢霉(Pseudocercosporella fraxini)
            2.1.20 韋斯特?cái)M盤多毛孢(Pestalotiopsis vismiae)
            2.1.21 白腐真菌(Phanerochaete sordid)
            2.1.22 黃瓜萎蔫病菌(Plectosphaerella cucumerina)
            2.1.23 水稻紋枯病菌(Thanatephorus cucumeris)
            2.1.24 糞殼菌屬(Sordariomycetes sp.LCC10)
            2.1.25 炭角菌屬(Xylariaceae sp.LCC28)
            2.1.26 鏈狀假絲酵母(Candida catenulata)
            2.1.27 漢遜德巴利酵母(Debaryomyces hansenii)
            2.1.28 擔(dān)子菌類酵母菌(Pseudozyma aphidis)
            2.1.29 季也蒙畢赤酵母(Pichia guilliermondii)
            2.1.30 皮狀絲孢酵母(Trichosporon cutaneum)
        2.2 電泳結(jié)果
        2.3 真菌鑒定結(jié)果
        2.4 大熊貓生殖情況
    3 討論
        3.1 真菌組成宏觀分析
        3.2 鑒定方法的優(yōu)缺點(diǎn)
        3.3 樣品出現(xiàn)頻率最高真菌
        3.4 各大熊貓陰道真菌種分析
        3.5 陰道真菌結(jié)合大熊貓生殖情況分析
第三章 發(fā)情期大熊貓陰道酵母菌的藥敏分析
    1 材料
        1.1 試驗(yàn)菌種
        1.2 主要試劑
        1.3 主要儀器
    2 方法
        2.1 培養(yǎng)基
        2.2 接種菌液的配制
        2.3 藥敏試驗(yàn)
    3 結(jié)果
        3.1 藥敏試驗(yàn)圖片
            3.1.1 鏈狀假絲酵母(Candida catenulata)
            3.1.2 皮狀絲孢酵母(Trichosporon cutaneum)
            3.1.3 擔(dān)子菌類酵母菌(Pseudozyma aphidis)
            3.1.4 漢氏德巴利氏酵母(Debaryomyces hansenii)
            3.1.5 季也蒙畢赤氏酵母(Pichia guilliermondii)
        3.2 抑菌圈直徑測(cè)量結(jié)果
    4 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
附錄



本文編號(hào)：4015456