豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）是有囊膜、單股正鏈RNA病毒，可以引起豬繁殖和呼吸系統(tǒng)障礙綜合征（PRRS）。2006年，我國10多個省市的一些豬場暴發(fā)的一種以高熱、高發(fā)病率和高死亡率為特征的傳染病，已經(jīng)證實其主要病原是NSP2非連續(xù)性缺失30個氨基酸為特征的高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒（HP-PRRSV），該病迅速波及全國，嚴(yán)重危害養(yǎng)豬業(yè)，嚴(yán)重影響了人類健康和社會經(jīng)濟(jì)的發(fā)展。因此，對高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒感染宿主致病機制的研究具有重要的意義。 豬是唯一能感染PRRSV的天然宿主，PRRSV對仔豬的損傷主要表現(xiàn)在呼吸系統(tǒng)，病毒也主要分布在免疫器官和肺，PRRSV感染的主要細(xì)胞為免疫系統(tǒng)的巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞。這些細(xì)胞越活躍，機體受到的攻擊可能越嚴(yán)重。肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞（PAECⅡ）幾乎為所有肺臟細(xì)胞始祖，作為肺泡上皮的“干細(xì)胞”。PRRSV也能引起嚴(yán)重的肺損傷。在正常的細(xì)胞更新及肺泡損傷修復(fù)過程中，發(fā)揮重要的作用。為了鑒定PRRSV導(dǎo)致的肺損傷與PAECⅡ損傷修復(fù)功能之間的關(guān)系，我們首先進(jìn)行PAECⅡ的分離與純化，后檢測細(xì)胞內(nèi)是否具有PRRSV感染所需受體。我們以HP-PR...

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圖2-3：PAECII的透射電鏡觀察注：圖A、B中標(biāo)尺所示長度為1μm，圖C中標(biāo)尺所示長度為2μm，圖D標(biāo)尺所示長度為4μm

CD圖2-3：PAECII的透射電鏡觀察注：圖A、B中標(biāo)尺所示長度為1μm，圖C中標(biāo)尺所示長度為2μm，圖D標(biāo)尺所示長度為4μm。Fig2-3PAECIIobservedwithtransmissionelectronmicroscopeNotes：A、B：....

圖3-2PRRSV感染PAECⅡ后免疫熒光結(jié)果

3.4PRRSV感染PAECⅡ后間接免疫熒光結(jié)果在熒光顯微鏡下觀察可看到0h時細(xì)胞未出現(xiàn)綠色熒光，12h和24h時出現(xiàn)綠色熒（圖3-2），而因48h細(xì)胞破裂無法進(jìn)行檢測，這說明細(xì)胞內(nèi)有PRRSVN蛋白表達(dá)，毒在細(xì)胞內(nèi)成功感染復(fù)制。圖3-1P....

圖3-1PRRSV感染PAECII后不同時間點的形態(tài)觀察，A：0h、B:12h、C：24h、D：CDAB

3.3.4PRRSV感染PAECⅡ后間接免疫熒光結(jié)果在熒光顯微鏡下觀察可看到0h時細(xì)胞未出現(xiàn)綠色熒光，12h和24h時出現(xiàn)綠色熒光（圖3-2），而因48h細(xì)胞破裂無法進(jìn)行檢測，這說明細(xì)胞內(nèi)有PRRSVN蛋白表達(dá)，病毒在細(xì)胞內(nèi)成功感染復(fù)制。圖3....

圖3-4：PRRSV感染PAECⅡ的PCR鑒定結(jié)果

CⅡ后PCR結(jié)果鑒定結(jié)果PCR擴(kuò)增顯示，感染后12,24,48h均在PRRSV的確感染了PAECⅡ型細(xì)胞，可以模型。1234M56bpECⅡ不同時間點總RNA提取M:DL2000plusPRRSV感染PAECⅡ后0,12,24,4....

本文編號：4015406