本文關(guān)鍵詞：豬繁殖障礙疫病4種病毒多重PCR方法的建立及初步應(yīng)用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的建立可用于臨床同時(shí)檢測(cè)豬細(xì)小病病毒(PPV)、豬圓環(huán)病病毒2型(PCV2)、豬偽狂犬病病毒(PRV)、豬繁殖與呼吸綜合征病毒(NA-PRRSV型和EU-PRRSV型)4種豬繁殖障礙性疫病病毒的多重PCR檢測(cè)方法,并進(jìn)行初步臨床應(yīng)用。方法參考Gen Bank中PPV、PRV、PCV2、EU-PRRSV和NA-PRRSV的全基因序列,利用Oligo6.0軟件針對(duì)全基因保守序列,分別設(shè)計(jì)并合成5對(duì)特異性引物,其產(chǎn)物分別為142bp、547bp、705bp、1367bp和331bp。在單重PCR基礎(chǔ)上,建立多重PCR檢測(cè)方法,對(duì)多重PCR反應(yīng)條件進(jìn)行優(yōu)化及其特異性、敏感性、重復(fù)性進(jìn)行檢驗(yàn),并對(duì)部分臨床樣本與文獻(xiàn)方法進(jìn)行平行試驗(yàn)驗(yàn)證該方法的可靠性。利用所建立的多重PCR檢測(cè)方法對(duì)來(lái)自遼西5市的325個(gè)樣本進(jìn)行應(yīng)用檢驗(yàn)。結(jié)果多重PCR方法中,PPV、PRV、PCV2、NA-PRRSV和EU-PRRSV最佳引物濃度分別為1.0μmol/L、0.5μmol/L、0.5μmol/L、1.5μmol/L和1.5μmol/L,退火溫度為60℃,最低檢測(cè)核酸量分別為155.0pg、45.2pg、17.2 pg、14.2 pg和43.6 pg,均已達(dá)到pg級(jí),在不同時(shí)間對(duì)相同樣本重復(fù)檢驗(yàn)6次,結(jié)果一致,與文獻(xiàn)方法進(jìn)行平行試驗(yàn),符合率為100%。利用多重PCR檢測(cè)方法對(duì)臨床采集的疑似豬病料的325份樣品進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果表明,PPV、PRV、PCV2、NA-PRRSV和EU-PRRSV的感染率分別為21.23%、53.53%、57.23%、52.00%和2.77%。結(jié)論本研究建立了PPV、PRV、PCV2、NA-PRRSV和EU-PRRSV多重PCR檢測(cè)方法,該方法具有快速、準(zhǔn)確、敏感等優(yōu)點(diǎn)�？梢赃\(yùn)用于臨床診斷。
【關(guān)鍵詞】：多重PCR 豬細(xì)小病毒 豬偽狂犬病毒 豬圓環(huán)病毒病2型 豬繁殖與呼吸綜合征 應(yīng)用
【學(xué)位授予單位】：錦州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S858.28
【目錄】：

• 中文論著摘要4-6
• 英文論著摘要6-8
• 英文縮略語(yǔ)表8-9
• 前言9-10
• 實(shí)驗(yàn)材料與方法10-15
• 結(jié)果15-24
• 討論24-27
• 結(jié)論27-28
• 本研究創(chuàng)新性的自我評(píng)價(jià)28-29
• 參考文獻(xiàn)29-32
• 附錄32-58
• 一、文獻(xiàn)綜述 豬繁殖障礙疫病4種病毒檢測(cè)方法研究進(jìn)展32-55
• 參考文獻(xiàn)45-55
• 二、在學(xué)期間科研成績(jī)55-56
• 三、致謝56-57
• 四、個(gè)人簡(jiǎn)介57-58

【相似文獻(xiàn)】

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