本文關鍵詞：豬繁殖障礙疫病4種病毒多重PCR方法的建立及初步應用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的建立可用于臨床同時檢測豬細小病病毒(PPV)、豬圓環(huán)病病毒2型(PCV2)、豬偽狂犬病病毒(PRV)、豬繁殖與呼吸綜合征病毒(NA-PRRSV型和EU-PRRSV型)4種豬繁殖障礙性疫病病毒的多重PCR檢測方法,并進行初步臨床應用。方法參考Gen Bank中PPV、PRV、PCV2、EU-PRRSV和NA-PRRSV的全基因序列,利用Oligo6.0軟件針對全基因保守序列,分別設計并合成5對特異性引物,其產(chǎn)物分別為142bp、547bp、705bp、1367bp和331bp。在單重PCR基礎上,建立多重PCR檢測方法,對多重PCR反應條件進行優(yōu)化及其特異性、敏感性、重復性進行檢驗,并對部分臨床樣本與文獻方法進行平行試驗驗證該方法的可靠性。利用所建立的多重PCR檢測方法對來自遼西5市的325個樣本進行應用檢驗。結果多重PCR方法中,PPV、PRV、PCV2、NA-PRRSV和EU-PRRSV最佳引物濃度分別為1.0μmol/L、0.5μmol/L、0.5μmol/L、1.5μmol/L和1.5μmol/L,退火溫度為60℃,最低檢測核酸量分別為155.0pg、45.2pg、17.2 pg、14.2 pg和43.6 pg,均已達到pg級,在不同時間對相同樣本重復檢驗6次,結果一致,與文獻方法進行平行試驗,符合率為100%。利用多重PCR檢測方法對臨床采集的疑似豬病料的325份樣品進行檢測,結果表明,PPV、PRV、PCV2、NA-PRRSV和EU-PRRSV的感染率分別為21.23%、53.53%、57.23%、52.00%和2.77%。結論本研究建立了PPV、PRV、PCV2、NA-PRRSV和EU-PRRSV多重PCR檢測方法,該方法具有快速、準確、敏感等優(yōu)點�？梢赃\用于臨床診斷。
【關鍵詞】：多重PCR 豬細小病毒 豬偽狂犬病毒 豬圓環(huán)病毒病2型 豬繁殖與呼吸綜合征 應用
【學位授予單位】：錦州醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S858.28
【目錄】：

• 中文論著摘要4-6
• 英文論著摘要6-8
• 英文縮略語表8-9
• 前言9-10
• 實驗材料與方法10-15
• 結果15-24
• 討論24-27
• 結論27-28
• 本研究創(chuàng)新性的自我評價28-29
• 參考文獻29-32
• 附錄32-58
• 一、文獻綜述 豬繁殖障礙疫病4種病毒檢測方法研究進展32-55
• 參考文獻45-55
• 二、在學期間科研成績55-56
• 三、致謝56-57
• 四、個人簡介57-58

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本文編號：401222