發(fā)布時(shí)間：2024-10-04 19:53

　　傳染病特別是病毒性傳染病,在全世界范圍內(nèi)對畜牧業(yè)造成嚴(yán)重?fù)p失,接種疫苗是目前控制傳染病最有效的手段。然而,養(yǎng)殖場雖然按免疫程序進(jìn)行了嚴(yán)格的疫苗接種,但在很多情況下動物仍然難以產(chǎn)生有效的免疫應(yīng)答,至使很多傳染病不能完全被控制。如注射疫苗的同時(shí),配合應(yīng)用適當(dāng)?shù)拿庖咴鰪?qiáng)劑可以輔助疫苗產(chǎn)生較好的免疫應(yīng)答,提高其免疫效力,從而提高疫苗免疫的效果。應(yīng)用免疫增強(qiáng)劑成為目前提高疫苗免疫效果的重要手段之一。現(xiàn)有的研究表明,中藥及其有效成分能夠顯著提高疫苗的免疫效果,很多中藥及其主要成分作為疫苗的免疫增強(qiáng)劑已開始在動物及人的臨床上使用。四川省是我國最大的中藥產(chǎn)區(qū),四川道地藥材一向以其品質(zhì)優(yōu)而著稱。本論文在現(xiàn)有文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上選取10種具有免疫調(diào)節(jié)作用的四川產(chǎn)道地藥材,包括川牛膝,川杜仲,川明參,川麥冬,川續(xù)斷,川丹參,川澤瀉,川芎,川白芷,川佛手；從中篩選出具有免疫增強(qiáng)作用的藥材,并進(jìn)一步研究其水提物的主要成分對疫苗免疫反應(yīng)的影響及分子機(jī)理,為進(jìn)一步從川產(chǎn)道地藥材中開發(fā)免疫增強(qiáng)劑提供科學(xué)依據(jù)。本文具體開展的研究和取得的結(jié)果如下： 1.十種川產(chǎn)道地藥材水提物對小鼠注射卵清白蛋白(OVA)免疫反應(yīng)的影響 ...

【文章頁數(shù)】：171 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞表
第一章 研究背景
    第一節(jié) 川產(chǎn)道地藥材免疫調(diào)節(jié)作用的研究進(jìn)展
        1 川牛膝的免疫調(diào)節(jié)作用
            1.1 對體液免疫的影響
            1.2 對細(xì)胞免疫的影響
            1.3 對紅細(xì)胞免疫的影響
            1.4 對機(jī)體免疫低下的保護(hù)作用
        2 杜仲的免疫調(diào)節(jié)作用
            2.1 對體液免疫的影響
            2.2 對細(xì)胞免疫的影響
            2.3 對免疫器官的影響
        3 川明參的免疫調(diào)節(jié)作用
            3.1 對體液免疫的影響
            3.2 對細(xì)胞免疫的影響
        4 川麥冬免疫調(diào)節(jié)作用
            4.1 對細(xì)胞免疫的影響
            4.2 對免疫器官的影響
            4.3 對免疫低下的保護(hù)作用
            4.4 對過敏反應(yīng)的影響
        5 川續(xù)斷免疫調(diào)節(jié)作用
            5.1 對細(xì)胞免疫的影響
            5.2 對免疫低下的保護(hù)作用
        6 丹參的免疫調(diào)節(jié)作用
            6.1 對細(xì)胞免疫的影響
            6.2 對紅細(xì)胞免疫的影響
            6.3 對免疫器官的影響
            6.4 對細(xì)胞因子的影響
            6.5 對機(jī)體免疫低下的保護(hù)作用
        7 川澤瀉的免疫調(diào)作用
        8 川芎的免疫調(diào)節(jié)作用
        9 川白芷免疫調(diào)節(jié)作用
        10 川佛手的免疫調(diào)節(jié)作用
    第二節(jié) 中藥多糖免疫調(diào)節(jié)作用的研究進(jìn)展
        1 中藥多糖的免疫調(diào)節(jié)作用
            1.1 對體液免疫的影響
            1.2 對細(xì)胞免疫的影響
            1.3 對細(xì)胞因子的影響
            1.4 對紅細(xì)胞免疫的影響
            1.5 對細(xì)胞毒淋巴細(xì)胞(NK,CTL)殺傷活性的影響
            1.6 對單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)的影響
        2 中藥多糖免疫調(diào)節(jié)作用的途徑
            2.1 通過促進(jìn)樹突細(xì)胞成熟和遷移途徑激活機(jī)體免疫反應(yīng)
                2.1.1 樹突細(xì)胞的來源及其在免疫反應(yīng)中的作用
                2.1.2 樹突細(xì)胞的遷移在免疫反應(yīng)中的作用
                2.1.3 樹突細(xì)胞的成熟在免疫反應(yīng)中的作用
            2.2 通過Toll樣受體通路激活免疫反應(yīng)
                2.2.1 Toll樣受體在機(jī)體免疫反應(yīng)中的作用
                2.2.2 免疫增強(qiáng)劑對Toll樣受體的調(diào)節(jié)
            2.3 通過CD4~+CD25~+Foxp3~+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞發(fā)揮調(diào)節(jié)作用
                2.3.1 調(diào)節(jié)性Treg細(xì)胞在機(jī)體免疫反應(yīng)中的作用
                2.3.2 免疫增強(qiáng)劑對Treg細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用
    第三節(jié) 中藥川牛膝的研究進(jìn)展
        1 川牛膝的本草考證
        2 栽培、加工炮制與品質(zhì)研究
        3 藥理作用
            3.1 對血液循環(huán)系統(tǒng)的影響
            3.2 對機(jī)體免疫功能的影響
            3.3 對泌尿生殖系統(tǒng)的影響
            3.4 抗腫瘤作用
            3.5 抗病毒作用
            3.6 抗衰老作用
            3.7 抗炎作用
            3.8 補(bǔ)益作用
        4 臨床應(yīng)用概況
    第四節(jié) 立題依據(jù)、研究內(nèi)容、技術(shù)路線與方法
        1 立題依據(jù)
        2 研究內(nèi)容、技術(shù)路線與方法
            2.1 研究內(nèi)容
            2.2 技術(shù)路線
            2.3 方法
    參考文獻(xiàn)
第二章 十種川產(chǎn)道地藥材水提物對小鼠注射卵清白蛋白(OVA)免疫反應(yīng)的影響
    1 材料
        1.1 主要試劑
            1.1.1 試驗(yàn)用中藥
            1.1.2 免疫試劑
            1.1.3 ELISA主要試劑
        1.2 主要儀器
        1.3 試驗(yàn)動物
    2 方法
        2.1 中藥水提物的制備
        2.2 動物分組和免疫程序
        2.3 血樣采集
        2.4 OVA特異性IgG水平的檢測
        2.5 OVA特異性IgG亞類水平的檢測
        2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 十種中藥水提物對血清中OVA特異性IgG抗體水平的影響
        3.2 三種中藥水提物對血清中OVA特異性抗體亞類IgG1、IgG2a、IgG2b水平的影響
    4 討論
    5 小結(jié)
第三章 不同劑量川牛膝水提物對小鼠注射卵清白蛋白(OVA)免疫反應(yīng)的影響
    1 材料
        1.1 主要試劑
            1.1.1 動物免疫試劑
            1.1.2 中藥
            1.1.3 ELISA所用試劑
            1.1.4 T淋巴細(xì)胞增殖所用試劑
            1.1.5 細(xì)胞因子檢測所用試劑
        1.2 主要儀器
        1.3 試驗(yàn)動物
    2 方法
        2.1 川牛膝水提物的制備
        2.2 動物分組和免疫程序
        2.3 血樣采集
        2.4 內(nèi)毒素檢測
        2.5 OVA特異性IgG水平的檢測
        2.6 OVA特異性抗體亞類(IgG1、IgG2a和IgG2b)水平的檢測
        2.7 T淋巴細(xì)胞增殖能力檢測
        2.8 淋巴細(xì)胞培養(yǎng)上清液中細(xì)胞因子濃度的檢測
        2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 RC對血清OVA特異性IgG抗體水平的影響
        3.2 RC對血清OVA特異性抗體亞類IgG1,IgG2a,IgG2b水平的影響
        3.3 RC對T淋巴細(xì)胞增殖能力的影響
        3.4 RC對脾淋巴細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IL-4和IFN-γ含量的影響
        3.5 RC對小鼠體重的影響
    4 討論
        4.1 RC對OVA受免小鼠體液免疫反應(yīng)的影響
        4.2 RC對OVA受免小鼠細(xì)胞因子的影響
        4.3 RC對OVA受免小鼠細(xì)胞免疫反應(yīng)的影響
        4.4 RC對小鼠的安全性
    5 小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
第四章 川牛膝多糖體外免疫活性研究
    1 材料
        1.1 主要試劑與藥品
            1.1.1 川牛膝多糖
            1.1.2 測定淋巴細(xì)胞最大安全濃度所用試劑
            1.1.3 淋巴細(xì)胞增殖所用試劑
            1.1.4 細(xì)胞因子檢測所用試劑
            1.1.5 NK細(xì)胞殺傷試驗(yàn)染色主要試劑
        1.2 主要儀器
        1.3 試驗(yàn)動物
    2 方法
        2.1 對脾淋巴細(xì)胞最大安全濃度測定
        2.2 淋巴細(xì)胞增殖能力檢測
        2.3 脾淋巴細(xì)胞培養(yǎng)上清液中細(xì)胞因子濃度的檢測
        2.4 NK細(xì)胞殺傷活力檢測
            2.4.1 效應(yīng)細(xì)胞的制備
            2.4.2 K562細(xì)胞的復(fù)蘇及培養(yǎng)
            2.4.3 細(xì)胞的傳代與培養(yǎng)
            2.4.4 細(xì)胞計(jì)數(shù)和細(xì)胞活力
            2.4.5 靶細(xì)胞(K562)染色
            2.4.6 NK細(xì)胞殺傷活力檢測
        2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 RCPS對脾淋巴細(xì)胞最大無毒濃度的測定
        3.2 RCPS體外對淋巴細(xì)胞增殖的影響
        3.3 RCPS體外對脾淋巴細(xì)胞分泌細(xì)胞因子能力的影響
        3.4 RCPS在體外對NK細(xì)胞殺傷活性的影響
    4 討論
        4.1 RCPS在體外對淋巴細(xì)胞的毒性
        4.2 RCPS在體外對淋巴細(xì)胞增值能力的影響
        4.3 RCPS在體外對淋巴細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的影響
        4.4 RCPS在體外對NK細(xì)胞殺傷活性的影響
    5 小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
第五章 川牛膝多糖對小鼠注射卵清白蛋白(OVA)免疫反應(yīng)的影響及機(jī)理研究
    1 材料
        1.1 主要試劑
            1.1.1 動物免疫試劑
            1.1.2 川牛膝多糖
            1.1.3 ELISA所用試劑
            1.1.4 T淋巴細(xì)胞增殖所用試劑
            1.1.5 胞內(nèi)細(xì)胞因子及表面分子熒光染色試劑
            1.1.6 體內(nèi)CTL染色主要試劑
            1.1.7 NK細(xì)胞殺傷試驗(yàn)所用試劑
            1.1.8 腹腔巨噬細(xì)胞吞噬試驗(yàn)主要試劑
            1.1.9 內(nèi)毒素檢測所用試劑
        1.2 主要儀器
        1.3 試驗(yàn)動物
    2 方法
        2.1 動物分組及免疫
        2.2 血樣采集
        2.3 內(nèi)毒素檢測
        2.4 OVA特異性IgG水平的檢測
        2.5 OVA特異性抗體亞類(IgG1、IgG2a和IgG2b)水平的檢測
        2.6 T淋巴細(xì)胞增殖能力檢測
        2.7 脾淋巴細(xì)胞培養(yǎng)上清液中細(xì)胞因子濃度的檢測
        2.8 胞內(nèi)細(xì)胞因子染色及檢測
        2.9 體內(nèi)CTL殺傷能力檢測
            2.9.1 靶細(xì)胞的制備
            2.9.2 小鼠體內(nèi)CTL殺傷活性檢測
        2.10 NK細(xì)胞殺傷能力檢測
        2.11 腹腔巨噬細(xì)胞吞噬活性檢測
        2.12 共刺激信號分子(CD40、CD80、CD86)的表達(dá)水平的檢測
        2.13 CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞的表達(dá)水平的檢測
        2.14 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 RCPS對血清特異性IgG抗體水平的影響
        3.2 RCPS對血清特異性抗體亞類IgG1,IgG2a,IgG2b水平的影響
        3.3 RCPS對T淋巴細(xì)胞增殖能力的影響
        3.4 RCPS對脾淋巴細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IL-4和IFN-γ含量的影響
        3.5 RCPS對胞內(nèi)細(xì)胞因子表達(dá)水平的影響
            3.5.1 CD4~+T細(xì)胞IL-2表達(dá)水平
            3.5.2 CD4~+T細(xì)胞IL-4表達(dá)水平
            3.5.3 CD4~+T細(xì)胞IFN-γ表達(dá)水平
            3.5.4 CD8~+T細(xì)胞IFN-γ表達(dá)水平
        3.6 RCPS對CTL體內(nèi)殺傷能力的影響
        3.7 RCPS對NK殺傷能力的影響
        3.8 RCPS對腹腔巨噬細(xì)胞吞噬能力的影響
        3.9 RCPS對樹突細(xì)胞共刺激信號分子(CD40、CD80、CD86)表達(dá)水平的影響
            3.9.1 共刺激信號分子CD40表達(dá)水平
            3.9.2 共刺激信號分子CD80表達(dá)水平
            3.9.3 共刺激信號分子CD86表達(dá)水平
        3.10 RCPS對CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg細(xì)胞的表達(dá)水平的影響
        3.11 RCPS對試驗(yàn)小鼠體重的影響
    4 討論
        4.1 RCPS對OVA受免小鼠體液免疫反應(yīng)的影響
        4.2 RCPS對OVA受免小鼠細(xì)胞因子的影響
        4.3 RCPS對OVA受免小鼠細(xì)胞免疫反應(yīng)的影響
            4.3.1 RCPS對OVA受免小鼠T淋巴細(xì)胞增殖能力的影響
            4.3.2 RCPS對OVA受免小鼠CTL、NK細(xì)胞殺傷能力的影響
            4.3.3 RCPS對OVA受免小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬能力的影響
        4.4 RCPS對OVA受免小鼠樹突細(xì)胞(DCs)成熟的影響
        4.5 RCPS對OVA受免小鼠CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg細(xì)胞的影響
        4.6 RCPS對小鼠的安全性
    5 小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
第六章 川牛膝多糖對小鼠注射口蹄疫疫苗免疫反應(yīng)的影響及分子機(jī)制研究
    1 材料
        1.1 主要試劑
            1.1.1 動物免疫試劑
            1.1.2 川牛膝多糖
            1.1.3 ELISA所用試劑
            1.1.4 T淋巴細(xì)胞增殖所用試劑
            1.1.5 細(xì)胞因子及表面分子熒光染色試劑
            1.1.6 體內(nèi)CTL染色主要試劑
            1.1.7 NK細(xì)胞殺傷試驗(yàn)所用試劑
            1.1.8 腹腔巨噬細(xì)胞吞噬試驗(yàn)所需試劑
            1.1.9 Real-Time PCR試驗(yàn)所用試劑
        1.2 主要儀器
        1.3 試驗(yàn)動物
    2 方法
        2.1 動物分組及免疫
        2.2 血樣采集
        2.3 FMDV特異性IgG水平的檢測
        2.4 FMDV特異性抗體亞類(IgG1、IgG2a和IgG2b)水平的檢測
        2.5 T細(xì)胞增殖能力檢測
        2.6 胞內(nèi)細(xì)胞因子染色及檢測
        2.7 體內(nèi)CTL殺傷能力檢測
            2.7.1 靶細(xì)胞的制備
            2.7.2 小鼠體內(nèi)CTL殺傷活性檢測
        2.8 NK細(xì)胞殺傷能力檢測
        2.9 腹腔巨噬細(xì)胞吞噬試驗(yàn)
        2.10 Real-Time PCR檢測細(xì)胞因子及信號通路分子
            2.10.1 總RNA的提取
            2.10.2 cDNA第一鏈的合成
            2.10.3 PCR引物的設(shè)計(jì)
            2.10.4 Real-time PCR反應(yīng)體系及反應(yīng)程序
        2.11 共刺激信號分子(CD40、CD80、CD86)的檢測
        2.12 CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg細(xì)胞的檢測
        2.13 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 RCPS對血清FMDV特異性IgG抗體水平的影響
        3.2 RCPS對血清FMDV特異性抗體亞類(IgG1,IgG2a,IgG2b)水平的影響
        3.3 RCPS對T淋巴細(xì)胞增殖能力的影響
        3.4 RCPS對胞內(nèi)細(xì)胞因子表達(dá)水平的影響
            3.4.1 CD4~+T細(xì)胞IL-2表達(dá)水平
            3.4.2 CD4~+T細(xì)胞IL-4表達(dá)水平
            3.4.3 CD4~+T細(xì)胞IFN-γ表達(dá)水平
            3.4.4 CD8~+T細(xì)胞IFN-γ表達(dá)水平
        3.5 RCPS對CTL體內(nèi)殺傷能力的影響
        3.6 RCPS對NK體內(nèi)殺傷能力的影響
        3.7 RCPS對腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬活性的影響
        3.8 RCPS對DCs共刺激信號分子(CD40、CD80、CD86)的表達(dá)水平的影響
            3.8.1 共刺激信號分子CD40表達(dá)水平
            3.8.2 共刺激信號分子CD80表達(dá)水平
            3.8.3 共刺激信號分子CD86表達(dá)水平
        3.9 RCPS對樹突細(xì)胞MHC Ⅰ、MHC Ⅱ mRNA表達(dá)水平的影響
        3.10 RCPS對DC趨化因子受體CXCR4、CCR7 mRNA表達(dá)水平的影響
        3.11 RCPS對脾淋巴細(xì)胞中IL-2、IL-4、IL-10、IFN-γ的mRNA表達(dá)水平
        3.12 RCPS對脾淋巴細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄因子T-bet和GATA-3的mRNA表達(dá)水平的影響
        3.13 RCPS對脾淋巴細(xì)胞中TLR-2、TLR-4 mRNA表達(dá)水平的影響
        3.14 RCPS對脾淋巴細(xì)胞中TGF-β mRNA表達(dá)水平的影響
        3.15 RCPS對CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg細(xì)胞表達(dá)水平的影響
        3.16 RCPS對試驗(yàn)小鼠體重的影響
    4 討論
        4.1 RCPS對FMDV受免小鼠體液免疫反應(yīng)的影響
        4.2 RCPS對FMDV受免小鼠細(xì)胞因子的產(chǎn)生和初始T細(xì)胞分化的影響
        4.3 RCPS對FMDV受免小鼠細(xì)胞免疫反應(yīng)的影響
            4.3.1 RCPS對FMDV受免小鼠T淋巴細(xì)胞增殖能力的影響
            4.3.2 RCPS對FMDV受免小鼠CTL、NK細(xì)胞殺傷能力的影響
            4.3.3 RCPS對FMDV受免小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬能力的影響
        4.4 RCPS對FMDV受免小鼠樹突細(xì)胞成熟及遷移的影響
            4.4.1 RCPS對樹突細(xì)胞成熟的影響
            4.4.2 RCPS對樹突細(xì)胞遷移的影響
        4.5 RCPS對FMDV受免小鼠TOLL樣受體(TLR-2,TLR-4)的影響
        4.6 RCPS對FMDV受免小鼠轉(zhuǎn)化生長因子β(TGF-β)的影響
        4.7 RCPS對FMDV受免小鼠CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg細(xì)胞的影響
        4.8 RCPS對小鼠的安全性
    5 小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
第七章 全文結(jié)論
本研究的創(chuàng)新點(diǎn)
有待進(jìn)一步研究的問題
附錄：試驗(yàn)的部分圖片
致謝
攻讀博士期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文及參加科研情況



本文編號：4007079