精原干細(xì)胞(spermatogonial stem cells,SSCs)體外培養(yǎng)體系是精子發(fā)生機(jī)理研究的基礎(chǔ),也為轉(zhuǎn)基因新技術(shù)研發(fā)和優(yōu)良家畜保種提供了新途徑,目前小鼠SSCs體外培養(yǎng)體系較為成熟,但是,大動物培養(yǎng)體系尚在探索中。分析表明,機(jī)械分離結(jié)合酶消化、流式細(xì)胞分選及免疫磁珠分選法正在成為SSCs分離純化的主要方法；作為培養(yǎng)體系重要成分,血清和飼養(yǎng)層促進(jìn)了SSCs的自我更新和增殖。膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(glial cell Line-derived neurotrophic factor, GDNE)在睪丸支持細(xì)胞(Sertoli cells, SCs)和SSCs之間扮演重要的角色。SCs分泌的GDNF可促進(jìn)SSCs的自我更新和增殖,并抑制其分化,但隨后SSCs會由于SCs的過度生長而消亡,SCs的快速生長與SSCs自我更新和增殖間的矛盾關(guān)系表明,SSCs的純化是建立其長期培養(yǎng)體系的關(guān)鍵。為摸索出一種高效SSCs純化方法,本文采用免疫磁珠分選法,使用干細(xì)胞抗體CD90.2進(jìn)行小鼠SSCs的純化富集。并采用流式細(xì)胞分析法和定量PCR驗(yàn)證了磁珠分選效率。流式細(xì)胞分析結(jié)果：免疫磁珠...

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖2.1:小鼠睪丸內(nèi)生殖細(xì)胞系及其對應(yīng)出現(xiàn)的時期(ARBellveetal.,1977；Dymetal.,2009)

開始減數(shù)分裂，出現(xiàn)初級精母細(xì)胞、次級精母細(xì)胞、精子細(xì)胞，導(dǎo)致SSCs比例占睪丸總細(xì)胞的比例下降（ARBellveetal.1977)。因此，6d左右的小鼠睪丸中干細(xì)胞比例最多（見圖2.1)。另外，對于豬睪丸性原細(xì)胞分離的研究表明，酶消化法與機(jī)械法相結(jié)合比單純的機(jī)械法得到的....

圖2.2:自制口吸管

此時，如果不及時將克隆團(tuán)吸出，SSCs會被迅速生長的支持細(xì)胞所淹沒。(1) 將培養(yǎng)皿移至倒置顯微鏡下，在200X鏡下，使用自制口吸管（如圖2.2)將SSCs克隆團(tuán)吸出，為避免操作過程中造成污染，可在培養(yǎng)皿中滴加甘油與外界空氣隔絕；(2) 吸出的細(xì)胞經(jīng)離心后使用CI-MEM完全培....

圖2.3:免疫磁珠分選細(xì)胞流程圖

圖2.3:免疫磁珠分選細(xì)胞流程圖Fig2.3：TheflowchartofMACS果

圖2.5:MEF細(xì)胞培養(yǎng)及絲裂霄素處理效果（200x)

■a圖2.5:MEF細(xì)胞培養(yǎng)及絲裂霄素處理效果（200x)注：A:F0MEF,B：F1MEF,C：F3MEF,D：絲裂霄素C處理后的細(xì)胞Fig2.5：TheresultofMEFcultureedandtreatedbyMMC(200x)N....

本文編號：3996310