目的：外周血中游離的DNA主要是指存在于血漿，血清等循環(huán)系統(tǒng)里的一些小片段DNA。它是機(jī)體代謝的正常生理表現(xiàn)，但是在一些病變或類病變機(jī)體中這類游離的DNA的含量和組成會發(fā)生變化。這些研究結(jié)果在一些疾病的臨床診斷以及非創(chuàng)傷性早期妊娠診斷方面給人們提供了一個(gè)新的檢測診斷方法。本研究應(yīng)用三種方法從綿羊外周血漿/血清中分離提取游離DNA，建立高效的外周血游離DNA提取方法，并對SRY基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增開展早期胎兒性別鑒定，同時(shí)對利用游離DNA進(jìn)行基因突變篩選的可行性做初步的研究。 方法：1、綿羊外周血中游離DNA提取及SRY基因檢測。利用加熱法、酚氯仿法以及試劑盒從500μL血漿/血清中提取游離的DNA。根據(jù)游離DNA片段的特點(diǎn)分別設(shè)計(jì)擴(kuò)增產(chǎn)物為168bp的MC1R檢測引物和178bp的SRY基因引物進(jìn)行普通PCR檢測。 2、不同妊娠時(shí)期胎兒性別鑒定。利用試劑盒提取血漿樣品中游離DNA，設(shè)計(jì)巢式PCR引物，優(yōu)化擴(kuò)增體系。對SRY基因特異性擴(kuò)增，并統(tǒng)計(jì)各個(gè)妊娠階段的檢測結(jié)果與分娩結(jié)果分析。 3、利用酶切及HRM技術(shù)對血漿DNA中綿羊FecB基因進(jìn)行分型效果研究。 結(jié)果：1、利用加熱法、酚氯仿法、...

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
項(xiàng)目資助
摘要
Abstract
英文縮略詞表
前言
    1 研究目的和意義
    2 論文的理論依據(jù)
    3 論文總體研究思路
        3.1 綿羊外周血中游離 DNA 分離提取方法的建立：
        3.2 利用巢氏 PCR 對游離胎兒 DNA 檢測進(jìn)而開展胎兒性別鑒定：
        3.3 基于 HRM 的外周血游離 DNA 用于基因分型的研究：
第一章 文獻(xiàn)綜述
    前言
    1 游離胎兒 DNA 的病理、生理學(xué)機(jī)制
    2 游離胎兒 DNA 的組織來源
        2.1 胎兒造血細(xì)胞
        2.2 胎盤
        2.3 胎兒和母體之間 DNA 分子的直接轉(zhuǎn)運(yùn)
    3 游離胎兒 DNA 的提取分離
        3.1 直接熱提取法
        3.2 酚氯仿法
        3.3 商業(yè)試劑盒
    4 游離胎兒 DNA 的檢測
        4.1 普通 PCR 擴(kuò)增法
        4.2 巢式 PCR 檢測
        4.3 熒光定量 PCR 法
        4.4 引物延伸 PCR 法
        4.5 質(zhì)譜法(MS)檢測
    5 游離胎兒 DNA 的臨床應(yīng)用
        5.1 妊娠胎兒性別鑒定
        5.2 、性別相關(guān)遺傳疾病的診斷
    6 其他遺傳相關(guān)疾病的臨床診斷
        6.1 、染色體非整倍體疾病的診斷
        6.2 、Rh D 血型檢測
    7 基于 HRM 的基因分型技術(shù)
    8、存在的問題及研究前景
第二章 試驗(yàn)研究
    試驗(yàn)一 綿羊外周血中游離 DNA 提取及 SRY 基因檢測
        引言
        1 材料和方法
            1.1 材料
                1.1.1 實(shí)驗(yàn)樣品采集和制備
                1.1.2 所需設(shè)備儀器及試劑
            1.2 方法
                1.2.1 酚氯仿法提取血漿/血清游離 DNA
                1.2.2 加熱法提取血漿/血清游離 DNA
                1.2.3 利用試劑盒提取血漿/血清游離 DNA
                1.2.4 PCR 反應(yīng)
                1.2.5 凝膠電泳分析
        2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            2.1 采用不同提取方法檢測結(jié)果
            2.2 檢測不同來源模板擴(kuò)增的結(jié)果
            2.3 SRY 基因的檢測
        3 討論
        4 結(jié)論
    試驗(yàn)二 基于巢式 PCR 的游離胎兒 DNA 性別鑒定
        引言
        1 材料和方法
            1.1 材料
                1.1.1 實(shí)驗(yàn)樣品采集和制備
                1.1.2 所需設(shè)備儀器及試劑
            1.2 方法
                1.2.1 利用加熱法提取血漿游離 DNA
                1.2.2 巢式 PCR 反應(yīng)及其第二輪反應(yīng)體系優(yōu)化
                1.2.3 凝膠電泳分析
                1.2.4 結(jié)果判定統(tǒng)計(jì)
        2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            2.1 巢式 PCR 第二輪擴(kuò)增體系優(yōu)化結(jié)果
            2.2 血漿樣本擴(kuò)增結(jié)果
            2.3 性別判定結(jié)果
            2.4 不同妊娠時(shí)期鑒定準(zhǔn)確率
        3 討論
        4 結(jié)論
    試驗(yàn)三 基于 HRM 的游離 DNA 中 FecB 基因突變篩選的可行性研究
        前言
        1 材料和方法
            1.1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.2 所需設(shè)備儀器及試劑
            1.3 實(shí)驗(yàn)方法
                1.3.1 血液基因組的提取
                1.3.2 引物設(shè)計(jì)合成
                1.3.3 不同引物濃度
                1.3.4 不同 Mg²+濃度
                1.3.5 染料添加量對 HRM 的影響分析
                1.3.6 染料添加方式對 HRM 分析的影響
                1.3.7 HRM 分析
                1.3.8 進(jìn)行 PCR-RLFP 檢測
                1.3.9 基因的克隆測序鑒定
        2 結(jié)果
            2.1 不同引物濃度對 HRM 分析的影響
            2.2 不同 Mg2+濃度對 HRM 分析的影響
            2.3 染料濃度梯度結(jié)果分析
            2.4 染料添加時(shí)間差異結(jié)果分析
            2.5 PCR-RLFP 檢測結(jié)果
            2.6 測序結(jié)果
        3 討論
        4、結(jié)論
全文結(jié)論及研究特色與創(chuàng)新
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡介及在學(xué)成果
石河子大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文導(dǎo)師評閱表



本文編號：3980222