α-酪蛋白是牛乳蛋白中含量最高的蛋白，約占牛乳蛋白總量的40%左右，并且，其在牛乳中的含量相對(duì)穩(wěn)定，因此，可以將其含量作為檢測(cè)牛乳中是否摻入其他蛋白質(zhì)的檢測(cè)指標(biāo)。本研究以兩α-酪蛋白標(biāo)準(zhǔn)品：大分子（C-6780）和含有六個(gè)氨基酸的寡肽（C-1658）作為研究對(duì)象。 以大分子作為免疫原，通過對(duì)BALB/C小鼠進(jìn)行腹腔免疫注射，三免后檢測(cè)小鼠陽性血清效價(jià)，達(dá)到細(xì)胞融合的要求之后，取出其脾細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞融合。陽性雜交瘤細(xì)胞株的篩選是使用ELISA方法進(jìn)行檢測(cè)融合后的細(xì)胞的培養(yǎng)基上清液的情況進(jìn)行的，由此篩選出陽性株，進(jìn)而通過有限稀釋法對(duì)其亞克隆，獲得一株單克隆抗體細(xì)胞株4H3，其能夠穩(wěn)定地分泌抗α-酪蛋白的抗體，并且，經(jīng)鑒定其抗體亞類為IgG1。通過對(duì)小鼠進(jìn)行體內(nèi)誘生法獲得腹水，使用親和層析法對(duì)其進(jìn)行純化。同樣以大分子作為免疫原，對(duì)新西蘭大白兔進(jìn)行頸背部散點(diǎn)注射和大腿內(nèi)側(cè)肌肉注射的方法進(jìn)行免疫，對(duì)其進(jìn)行心臟采血，對(duì)全血進(jìn)行處理后得到抗大分子的多克隆抗體。并鑒定了所獲得的單抗和多抗的性質(zhì)，奠定了建立免疫學(xué)檢測(cè)方法的基礎(chǔ)。 由于寡肽屬于小分子物質(zhì)，不能刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體，因此，通過戊二...

【文章頁數(shù)】：85 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖1.1檢測(cè)免疫小鼠的血清效價(jià)Fig.1.1Titeroftheimmunizedmice

本試驗(yàn)采用常規(guī)免疫，在三免后的第7天，對(duì)小鼠進(jìn)行斷尾采血，通過ELISA方法對(duì)其效價(jià)進(jìn)行分析。同時(shí)，采取未免疫的小鼠血清作為陰性對(duì)照。由試驗(yàn)結(jié)果可知，兩只小鼠的陽性血清效價(jià)均可達(dá)到1:32000，達(dá)到細(xì)胞融合的要求，均可用于細(xì)胞融合。在融合前三天進(jìn)行加強(qiáng)免疫。

圖1.2腹水純化結(jié)果-親和層析法Fig.1.2Affinitychromatographyofpurifiedascites

圖1.2腹水純化結(jié)果-親和層析法Fig.1.2Affinitychromatographyofpurifiedascites化后腹水效價(jià)的測(cè)定ELISA檢測(cè)后，根據(jù)（待測(cè)孔D492nm值/對(duì)應(yīng)陰性孔D492nm值）≥2時(shí)，數(shù)為其效價(jià)可知，本試驗(yàn)所得單....

圖1.3純化后單抗效價(jià)的測(cè)定Fig1.3Thetiterofpurifiedascites

圖1.2腹水純化結(jié)果-親和層析法Fig.1.2Affinitychromatographyofpurifiedascites.2.4純化后腹水效價(jià)的測(cè)定經(jīng)過ELISA檢測(cè)后，根據(jù)（待測(cè)孔D492nm值/對(duì)應(yīng)陰性孔D492nm值）≥2時(shí)，單抗的最稀釋....

圖1.4純化后抗體的SDS-PAGE結(jié)果

M：Marker；1：純化后腹水；2：未純化腹水圖1.4純化后抗體的SDS-PAGE結(jié)果M：Marker；1：purifiedascites；2：ascites；Fig.1.4TheSDS-PAGEgelselectrophoresisofascite亞....

本文編號(hào)：3974919