α-酪蛋白是牛乳蛋白中含量最高的蛋白，約占牛乳蛋白總量的40%左右，并且，其在牛乳中的含量相對穩(wěn)定，因此，可以將其含量作為檢測牛乳中是否摻入其他蛋白質(zhì)的檢測指標。本研究以兩α-酪蛋白標準品：大分子（C-6780）和含有六個氨基酸的寡肽（C-1658）作為研究對象。 以大分子作為免疫原，通過對BALB/C小鼠進行腹腔免疫注射，三免后檢測小鼠陽性血清效價，達到細胞融合的要求之后，取出其脾細胞與小鼠骨髓瘤細胞進行細胞融合。陽性雜交瘤細胞株的篩選是使用ELISA方法進行檢測融合后的細胞的培養(yǎng)基上清液的情況進行的，由此篩選出陽性株，進而通過有限稀釋法對其亞克隆，獲得一株單克隆抗體細胞株4H3，其能夠穩(wěn)定地分泌抗α-酪蛋白的抗體，并且，經(jīng)鑒定其抗體亞類為IgG1。通過對小鼠進行體內(nèi)誘生法獲得腹水，使用親和層析法對其進行純化。同樣以大分子作為免疫原，對新西蘭大白兔進行頸背部散點注射和大腿內(nèi)側(cè)肌肉注射的方法進行免疫，對其進行心臟采血，對全血進行處理后得到抗大分子的多克隆抗體。并鑒定了所獲得的單抗和多抗的性質(zhì)，奠定了建立免疫學(xué)檢測方法的基礎(chǔ)。 由于寡肽屬于小分子物質(zhì)，不能刺激機體產(chǎn)生抗體，因此，通過戊二...

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【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1.1檢測免疫小鼠的血清效價Fig.1.1Titeroftheimmunizedmice

本試驗采用常規(guī)免疫，在三免后的第7天，對小鼠進行斷尾采血，通過ELISA方法對其效價進行分析。同時，采取未免疫的小鼠血清作為陰性對照。由試驗結(jié)果可知，兩只小鼠的陽性血清效價均可達到1:32000，達到細胞融合的要求，均可用于細胞融合。在融合前三天進行加強免疫。

圖1.2腹水純化結(jié)果-親和層析法Fig.1.2Affinitychromatographyofpurifiedascites

圖1.2腹水純化結(jié)果-親和層析法Fig.1.2Affinitychromatographyofpurifiedascites化后腹水效價的測定ELISA檢測后，根據(jù)（待測孔D492nm值/對應(yīng)陰性孔D492nm值）≥2時，數(shù)為其效價可知，本試驗所得單....

圖1.3純化后單抗效價的測定Fig1.3Thetiterofpurifiedascites

圖1.2腹水純化結(jié)果-親和層析法Fig.1.2Affinitychromatographyofpurifiedascites.2.4純化后腹水效價的測定經(jīng)過ELISA檢測后，根據(jù)（待測孔D492nm值/對應(yīng)陰性孔D492nm值）≥2時，單抗的最稀釋....

圖1.4純化后抗體的SDS-PAGE結(jié)果

M：Marker；1：純化后腹水；2：未純化腹水圖1.4純化后抗體的SDS-PAGE結(jié)果M：Marker；1：purifiedascites；2：ascites；Fig.1.4TheSDS-PAGEgelselectrophoresisofascite亞....

本文編號：3974919