黏菌素(colistin)即多黏菌素E(polymyxin E),能有效治療革蘭氏陰性菌的感染,特別是對(duì)銅綠假單胞菌和鮑曼不動(dòng)桿有特效。然而由于黏菌素存在腎毒性和神經(jīng)毒性,二十世紀(jì)80年代其使用僅限于耐藥革蘭氏陰性菌感染的纖維囊性肺炎的治療。近10年內(nèi),由于多重耐藥革蘭氏陰性細(xì)菌的泛濫而新的有效的抗生素的開(kāi)發(fā)速度跟不上細(xì)菌強(qiáng)大的求生變異能力,多黏菌素重新進(jìn)入人們的視野,其臨床應(yīng)用價(jià)值再次得到認(rèn)識(shí)和評(píng)價(jià)。然而,其神經(jīng)毒性仍然是亟待解決的問(wèn)題。國(guó)外學(xué)者的研究發(fā)現(xiàn)維生素C能夠有效拮抗硫酸黏菌素所誘發(fā)的腎毒性,而維生素C對(duì)硫酸黏菌素所致神經(jīng)毒性的作用尚不清楚。本實(shí)驗(yàn)以人鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞(PC12)為對(duì)象,建立硫酸黏菌素神經(jīng)損傷體外模型,觀察維生素C對(duì)硫酸黏菌素誘導(dǎo)PC12細(xì)胞損傷的拮抗作用,并對(duì)其保護(hù)作用的可能機(jī)制進(jìn)行初步探討,以期減小硫酸黏菌素毒性,為硫酸黏菌素和維生素C在臨床上的聯(lián)合應(yīng)用提供理論依據(jù)和實(shí)踐基礎(chǔ)。 本實(shí)驗(yàn)首先分別以系列濃度硫酸黏菌素與PC12細(xì)胞作用不同時(shí)間,采用四甲基偶氮唑藍(lán)(3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyl tetr...

【文章頁(yè)數(shù)】：51 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 引言
    1.1 硫酸黏菌素概述
        1.1.1 硫酸黏菌素的理化性質(zhì)
        1.1.2 硫酸黏菌素的抗菌機(jī)理
        1.1.3 硫酸粘菌素腎毒性
        1.1.4 硫酸黏菌素神經(jīng)毒性
    1.2 細(xì)胞調(diào)亡
        1.2.1 細(xì)胞凋亡調(diào)控因子
        1.2.2 細(xì)胞凋亡途徑
    1.3 氧化應(yīng)激與細(xì)胞凋亡
    1.4 維生素C概述
        1.4.1 維生素C的理化性質(zhì)
        1.4.2 維生素C的轉(zhuǎn)運(yùn)
        1.4.3 維生素C的生物學(xué)功效
    1.5 細(xì)胞大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞(PC12)
    1.6 課題研究的目的與意義
2 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
        2.1.2 儀器
        2.1.3 試劑
        2.1.4 主要試劑的配制
    2.2 硫酸黏菌素誘導(dǎo)PC12細(xì)胞損傷模型的建立
        2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.2 繪制不同密度細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線(xiàn)
        2.2.3 MTT比色法檢測(cè)細(xì)胞活性
        2.2.4 硫酸黏菌素造模濃度及作用時(shí)間的篩選
    2.3 維生素C對(duì)硫酸黏菌素所致PC12細(xì)胞損傷的保護(hù)作用
        2.3.1 實(shí)驗(yàn)分組及藥物處理
        2.3.2 倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)
        2.3.3 細(xì)胞活力的測(cè)定
        2.3.4 乳酸脫氫酶(LDH)釋放的測(cè)定
        2.3.5 細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)含量測(cè)定
        2.3.6 超氧化物歧化酶(SOD)活性測(cè)定
        2.3.7 谷胱甘肽(GSH)含量的檢測(cè)
        2.3.8 DNA片段化的檢測(cè)
        2.3.9 細(xì)胞色素c(Cyt-c)的測(cè)定
        2.3.10 Caspase-9和caspase-3表達(dá)水平的RT-PCR分析
    2.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
3 結(jié)果
    3.1 硫酸黏菌素誘導(dǎo)PC12細(xì)胞損傷模型建立
        3.1.1 不同細(xì)胞密度下PC12細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線(xiàn)
        3.1.2 不同濃度硫酸黏菌素對(duì)PC12細(xì)胞活力的影響
    3.2 維生素C對(duì)硫酸黏菌素所致PC12細(xì)胞損傷的拮抗作用
        3.2.1 維生素C對(duì)硫酸黏菌素?fù)p傷的PC12細(xì)胞形態(tài)的影響
        3.2.2 維生素C對(duì)硫酸黏菌素?fù)p傷的PC12細(xì)胞活力的影響
        3.2.3 維生素C對(duì)硫酸黏菌素?fù)p傷的PC12細(xì)胞乳酸脫氫酶(LDH)釋放的影響
        3.2.4 維生素C對(duì)硫酸黏菌素?fù)p傷的PC12細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)含量的影響
        3.2.5 維生素C對(duì)硫酸黏菌素?fù)p傷的PC12細(xì)胞內(nèi)超氧化酶歧化酶(SOD)活性的影響
        3.2.6 維生素C對(duì)硫酸黏菌素?fù)p傷的PC12細(xì)胞內(nèi)GSH含量的影響
        3.2.7 維生素C對(duì)硫酸黏菌素誘導(dǎo)PC12細(xì)胞DNA片段化的影響
        3.2.8 維生素C對(duì)硫酸黏菌素誘導(dǎo)PC12細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞色素C(Cyt-c)含量的影響
        3.2.9 維生素C對(duì)硫酸黏菌素誘導(dǎo)PC12細(xì)胞Caspase-9和Caspase-3 mRNA表達(dá)水平的影響
4 討論
    4.1 硫酸黏菌素誘導(dǎo)PC12細(xì)胞損傷模型的評(píng)價(jià)
    4.2 維生素C對(duì)硫酸黏菌素誘導(dǎo)PC12細(xì)胞損傷的拮抗作用
        4.2.1 維生素C對(duì)硫酸黏菌素?fù)p傷的PC12細(xì)胞活力的影響
        4.2.2 維生素C對(duì)硫酸黏菌素?fù)p傷的PC12細(xì)胞膜的影響
        4.2.3 維生素C對(duì)硫酸黏菌素?fù)p傷的PC12細(xì)胞內(nèi)氧化水平的影響
    4.3 維生素C對(duì)硫酸黏菌素誘導(dǎo)PC12細(xì)胞損傷的拮抗作用的機(jī)制
5 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文



本文編號(hào)：3972476