牛呼吸道合胞體病毒病是由牛呼吸道合胞體病毒(Bovine Respiratory Syncytial virus,BRSV)引起的牛的一種傳染病。本病呈世界性流行,為了快速準(zhǔn)確的診斷該病,本研究在參考國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上,選取BRSV的N基因保守序列,設(shè)計(jì)合成特異性引物和探針,建立牛呼吸道合胞體病毒熒光定量RT-PCR檢測(cè)方法,并對(duì)牛鼻拭子核酸樣品進(jìn)行檢測(cè)。試驗(yàn)結(jié)果顯示,該方法的最佳引物濃度為400nmoL/L、探針濃度為250 nmoL/L,退火和延伸溫度均為60℃。敏感性高,可以檢測(cè)出的最低樣品濃度為10拷貝μ/L;特異性強(qiáng),能有效區(qū)分牛病毒性腹瀉病毒、牛染性鼻氣管炎病毒、牛副流感病毒3型、牛支原體、巴氏桿菌A型;重復(fù)性好,組內(nèi)、組間的Ct值變異系數(shù)均小于2%;建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)線(xiàn)性關(guān)系良好,相關(guān)系數(shù)(R²)為1.000,擴(kuò)增效率(E)為92.4%。利用建立的方法對(duì)內(nèi)蒙古不同牛場(chǎng)采集的鼻拭子的33份核酸樣品進(jìn)行熒光定量RT-PCR檢測(cè)。結(jié)果顯示,Ct值38左右,在33份核酸樣品中檢出BRSV陽(yáng)性5份。為了進(jìn)一步驗(yàn)證檢出的BRSV陽(yáng)性核酸,對(duì)擴(kuò)增出的基因片段進(jìn)行了克隆...

【文章頁(yè)數(shù)】：49 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖1牛呼吸道合胞體病毒模式圖

圖1牛呼吸道合胞體病毒模式圖Fig.1.Diagramofbovinerespiratorysyncytialvirus.因組編碼的蛋白功能吸道合胞體病毒的結(jié)構(gòu)蛋白白（Attachmentprotein，G蛋白）：為粘附蛋白，與病毒的基酸，有838個(gè)核苷酸....

圖3普通PCR產(chǎn)物的重組陽(yáng)性質(zhì)粒PCR鑒定

圖2常規(guī)PCR擴(kuò)增結(jié)果Fig.2ConventionalPCRresultsM.500bpDNALadder（bp）；1.BRSV擴(kuò)增產(chǎn)物；2.陰性對(duì)照CR產(chǎn)物的重組質(zhì)粒鑒定鑒定結(jié)果粒小量提取試劑盒提取牛呼吸道合胞體病毒重組質(zhì)粒凝膠電泳。結(jié)果顯示，目的片段....

圖2常規(guī)PCR擴(kuò)增結(jié)果

圖2常規(guī)PCR擴(kuò)增結(jié)果Fig.2ConventionalPCRresultsM.500bpDNALadder（bp）；1.BRSV擴(kuò)增產(chǎn)物；2.陰性對(duì)照常規(guī)PCR產(chǎn)物的重組質(zhì)粒鑒定1PCR鑒定結(jié)果采用質(zhì)粒小量提取試劑盒提取牛呼吸道合胞體病毒重組質(zhì)粒瓊脂....

圖4重組質(zhì)粒鑒定結(jié)果

圖4重組質(zhì)粒鑒定結(jié)果Fig.4IdentificationofrecombinantplasmidM1.500bpDNALadder；1為BRSV酶切；M2.5000bpDNALad結(jié)果R鑒定為陽(yáng)性質(zhì)粒的質(zhì)粒樣品送至北京華大基因科序結(jié)果在GenBa....

本文編號(hào)：3970485