牛副流感病毒3型(Bovine parainfluenza virus type 3,BPIV3)是一種非分節(jié)的單股負(fù)鏈RNA病毒,在世界分布廣泛,是引起牛呼吸道綜合征(Bovine respiratory disease complex,BRDC)的重要病原。BPIV3感染牛癥狀各異,輕者出現(xiàn)咳嗽發(fā)熱等癥狀,嚴(yán)重的會(huì)引起繼發(fā)的細(xì)菌感染,導(dǎo)致支氣管細(xì)胞壞死,出現(xiàn)肺炎等狀況。該病的廣泛存在嚴(yán)重制約養(yǎng)牛產(chǎn)業(yè)的進(jìn)一步發(fā)展,對(duì)養(yǎng)牛業(yè)的經(jīng)濟(jì)與發(fā)展造成了嚴(yán)重的損失。基于目前國內(nèi)對(duì)BPIV3的研究較少,還沒有商品化BPIV3檢測(cè)試劑盒,國外雖有檢測(cè)試劑盒,但檢測(cè)成本較高。因此,建立一種具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的BPIV3血清學(xué)檢測(cè)方法至關(guān)重要。另一方面,對(duì)BPIV3感染的研究離不開機(jī)制機(jī)理的研究,而檢測(cè)BPIV3機(jī)理及基因功能的研究,需要定量檢測(cè)蛋白的表達(dá),但缺乏相應(yīng)抗體。據(jù)報(bào)道,BPIV3的N蛋白是病毒核衣殼的主要成分,具有良好的免疫原性,可以用來制備檢測(cè)抗體。因此本項(xiàng)目主要從三個(gè)方面進(jìn)行研究。首先,進(jìn)行N蛋白原核表達(dá)載體的構(gòu)建與N蛋白的表達(dá)純化。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道與對(duì)N基因生物信息學(xué)分析,本實(shí)驗(yàn)克隆了編碼N蛋...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

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圖460份牛陰性血清間接ELISA檢測(cè)結(jié)果正態(tài)分布圖Fig.4Detectionof60negativeserumsamplesbyindirectELISAOD450nmvalue00.240.220.20.180.160.140.120.10.08

m值的下降比較明顯，均在35%以上，而5份陰性血清的OD450nm值變化不明顯(表2)，表明BPIV3能夠有效阻斷包被抗原與陽性血清的結(jié)合，重組N蛋白具有較強(qiáng)的特異性。2.4.2交叉阻斷反應(yīng)試驗(yàn)結(jié)果采用其它兩種常見的牛呼吸道病毒IBRV與BVDV的兔源陽性血清先與重組N蛋白包被的....

圖2重組N蛋白純化效果檢測(cè)40ku35ku25kuM:ProteinMarker;1:Negativecontrol;2:UnpurifiedNP;3:PurifiedNP

2:RecombinantNP圖3重組N蛋白的westernblot鑒定Fig.3RecombinantnucleocapsidproteinreactedwiththebovinepositiveserumagainstBPIV3表1間接ELISA方法反應(yīng)條件的優(yōu)化結(jié)果Tabl....

圖5交叉反應(yīng)阻斷試驗(yàn)結(jié)果Fig.5Theresultsofcross-reactionblockingtestTestgroupsNegativPositiv

圖1-1副流感病毒結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)圖

山東師范大學(xué)碩士學(xué)位論文2等也可以破壞其感染性，在20%濃度下就可以導(dǎo)致病毒失去活性。1.1.3BPIV3基因組結(jié)構(gòu)及其編碼蛋白BPIV3基因組在5′端和3′端沒有常見的帽子結(jié)構(gòu)和polyA尾巴，但在其基因組3′端有一段55nt左右的非常保守的非編碼區(qū)，稱為引導(dǎo)序列(1eader....

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