檢測不同代次廣西巴馬小型豬內(nèi)源性反轉(zhuǎn)錄病毒(PERV)感染HEK293細(xì)胞模型(HEK293-PERV-BM)中,HERV-W各基因mRNA和syncytin-1蛋白表達水平,以及HERV-W各基因變異情況,評價PERV的整合對HERV-W的影響。結(jié)果顯示,與HEK293細(xì)胞相比,PERV整合后,不同代次HEK293-PERV-BM中HERV-W gag、pol、env和syncytin-1的mRNA相對表達量出現(xiàn)不同程度的改變,且改變趨勢相似,即P10或P20后開始升高,至P30最高;選取相對表達量差別較大代次,檢測其syncytin-1蛋白,各代次間syncytin-1蛋白表達量的改變較mRNA的差別小。此外,PERV整合后,在P1～P55中HERV-W結(jié)構(gòu)基因僅發(fā)生個別位置的點突變,未見發(fā)生固定位置的點突變或基因片段的缺失、插入及重組。本試驗為系統(tǒng)評價PERV-BM在異種器官移植中的安全性提供參考。

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圖1各代次HEK293-PERV-BM細(xì)胞感染模型中HERV-Wgag(A)、HERV-Wpol(B)、HERV-Wenv(C)和syncytin-1(D)mRNA相對表達量

應(yīng)用SYBRGreenⅠ實時熒光定量PCR分別檢測HEK293和HEK293-PERV-BM中HERVgag、HERVpol、HERVenv、syncytin-1和humanβ-actin的mRNA表達水平。結(jié)果如圖1所示,與HEK293細(xì)胞相比,PERV整合后,不同....

圖2不同代次HEK293-PERV-BM細(xì)胞感染模型中syncytin-1的Westernblot檢測

按照HERV-W實時熒光定量PCR結(jié)果,選取相對表達量差別較大的第1,15,25,30代HEK293-PERV-BM進行Westernblot檢測,同時設(shè)HEK293和HEK293-PERV-PK為對照。結(jié)果如圖2所示,試驗組和對照組均出現(xiàn)55000的HERV-Wsyncy....

圖3不同代次HEK293-PERV-BM細(xì)胞感染模型中HERV-Wgag(A)、pol(B)、env(C)序列比對

OLDMIXON等[9]在NIH小型豬中發(fā)現(xiàn)了A型和C型PERV重組形成PERV-A/C病毒,其為滴度和感染性更強的重組病毒,而且PERV-BM在7號染色體上的整合與HERV-W位置較近,更加劇了對PERV與HERV重組的擔(dān)憂。本試驗結(jié)果表明,PERV-BM整合后,HERV-W....

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