空腸彎曲菌是一種重要的能引起人感染性腹瀉的食源性致病菌�；颊邥霈F(xiàn)急性和自限性腸炎,嚴重者還會出現(xiàn)全身性感染或者神經(jīng)性疾病-格林巴利綜合癥。大環(huán)內(nèi)酯類和氟喹諾酮類是臨床上常用的抗彎曲桿菌感染的藥物。而空腸彎曲菌對這兩類藥物的耐藥問題日益嚴重。為了從源頭上控制耐藥彎曲菌的產(chǎn)生,我們必須了解清楚耐藥菌的產(chǎn)生規(guī)律及其耐藥性和適應性機制。本實驗室前期研究發(fā)現(xiàn),以標準菌NCTC11168做參照,Cj0440c在高水平紅霉素耐藥菌中過量表達,且根據(jù)NCBI提供的信息,獲悉該基因是一種假定的廣義調(diào)節(jié)子。本研究選取Cj0440c基因為研究對象,運用分子生物學技術將標準菌及紅霉素誘導的耐藥菌的Cj0440c基因敲除,通過基因芯片篩選出Cj0440c敲除前后的差異表達基因,運用生物信息學分析與Cj0440c相關聯(lián)的基因,設計相關的表型實驗以驗證Cj0440c的作用,探討Cj0440c基因在空腸彎曲桿菌耐藥性和適應性中的作用。本課題的研究為生物信息庫提供了有利數(shù)據(jù),為防止彎曲菌耐藥性的產(chǎn)生和傳播提供了理論指導和支撐。 1.耐藥株的獲取及相應突變體的構建 為了探索未知基因Cj0440c的功能特征及其在耐藥性和...

【文章頁數(shù)】：121 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語表
1 前言
    1.1 研究背景
    1.2 研究進展
        1.2.1 耐藥性機制
        1.2.2 適應性研究
        1.2.3 功能未知基因Cj0440c
    1.3 研究內(nèi)容和目的意義
        1.3.1 研究思路
        1.3.2 研究內(nèi)容
        1.3.3 研究技術路線
        1.3.4 研究目的與意義
2 材料與方法
    2.1 菌株及實驗動物
    2.2 抗菌藥物及配制
    2.3 培養(yǎng)基與試劑
    2.4 儀器設備
    2.5 耐紅霉素空腸彎曲桿菌的誘導
    2.6 載體的構建
        2.6.1 載體構建方案
        2.6.2 突變載體的構建
        2.6.3 過表達載體的構建
    2.7 Cj0440c突變體的構建及過表達
        2.7.1 自然轉化
        2.7.2 電轉化
        2.7.3 突變體鑒定
    2.8 差異基因篩選
        2.8.1 基因芯片樣品的準備
        2.8.2 差異表達基因的檢測與分析及實時熒光定量驗證
    2.9 表型檢測
        2.9.1 生長力的測定
        2.9.2 藥物敏感性測定
        2.9.3 鞭毛形態(tài)觀察
        2.9.4 鞭毛遷移力的測定
        2.9.5 雞體內(nèi)定植能力的測定
        2.9.6 配對競爭實驗
3 結果與分析
    3.1 載體的確證
        3.1.1 突變載體pCJ0440c-kan的確證
        3.1.2 過表達載體pRY112-CJ0440c的確證
    3.2 突變體的確證
        3.2.1 SM的驗證
        3.2.2 RM的驗證
    3.3 總RNA質量檢驗報告
    3.4 芯片結果分析
    3.5 差異片段序列分析
    3.6 實時熒光定量PCR驗證
    3.7 表型結果
        3.7.1 生長力
        3.7.2 耐藥性的檢測
        3.7.3 空腸彎曲桿菌鞭毛形態(tài)的觀察
        3.7.4 運動性的考察
        3.7.5 在雞體內(nèi)的定植能力
        3.7.6 在雞體內(nèi)成對競爭實驗
4 討論
    4.1 敏感菌和耐藥菌突變體構建的探討
    4.2 相關差異基因分析及Cj0440c功能推測
        4.2.1 細菌表面鞭毛成分代謝
        4.2.2 糖基化
        4.2.3 過氧化氫酶
        4.2.4 一些假定蛋白的功能推測
        4.2.5 Cj0440c在敏感菌和耐藥菌中的不同作用
        4.2.6 Cj0440c對細菌與適應性的影響
5 全文總結
文獻綜述
    參考文獻
致謝
附錄
答辯委員所提問題



本文編號：3968941