發(fā)布時間：2024-04-25 20:14

　　中國倉鼠卵巢細(xì)胞(Chinese hamster ovary cell,CHO)作為哺乳動物細(xì)胞真核表達系統(tǒng),不僅能重組蛋白的天然結(jié)構(gòu),而且最大化保證了重組蛋白的生物學(xué)和免疫學(xué)功能,已廣泛用于生產(chǎn)醫(yī)用藥物、細(xì)胞因子和單抗等生物制劑。由于生產(chǎn)成本高,還沒有廣泛用于生產(chǎn)獸用疫苗抗原及其生物制劑,也沒有用于口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)重組抗原的生產(chǎn)。目前口蹄疫(Foot-and-mouth diseas,FMD)重組亞單位疫苗重組抗原的生產(chǎn)大多采用原核表達系統(tǒng),并不能保證其抗原天然結(jié)構(gòu)和生物學(xué)功能。因此,開發(fā)可高水平分泌表達具有天然結(jié)構(gòu)的FMDV抗原的基因工程細(xì)胞系顯得尤為重要,也是未來疫苗研究的發(fā)展趨勢。為此,本研究以O(shè)型FMDV抗原表位為材料,CHO細(xì)胞為研究對象,利用CRISPR/Cas9介導(dǎo)的同源重組技術(shù)為手段,構(gòu)建組成型高水平分泌FMDV抗原的基因工程細(xì)胞系,為規(guī)�；a(chǎn)具有天然結(jié)構(gòu)和功能的FMDV重組抗原提供生產(chǎn)用基因工程CHO細(xì)胞系。首先,利用信息學(xué)技術(shù)預(yù)測、篩選能提高CHO細(xì)胞分泌表達O型FMDV抗原表位(OME1)的信號肽...

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖2-1FMDV抗原多表位基因表達盒順序Fig.2-1FMDVAntigenmultiepitopegeneexpressioncassettesequence

中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文第二章增強CHO細(xì)胞分泌表達O型FMDV抗原表位重組蛋白的信號肽篩選11了防止兩個相鄰抗原表位間形成新的抗原表位，在相鄰抗原表位之間引入GGSSGG間隔子序列以確保每個抗原表位的獨立性。（圖2-1為FMDV抗原多表位基因表達盒順序）。根據(jù)CHO細(xì)胞密碼子....

圖2-2基因表達盒順序Fig.2-2Geneexpressioncassettesequence

中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文第二章增強CHO細(xì)胞分泌表達O型FMDV抗原表位重組蛋白的信號肽篩選14圖2-2基因表達盒順序Fig.2-2GeneexpressioncassettesequenceRE：抗原多表位基因；KOZAK：KOZAK序列；SignalPeptide：信號肽序....

圖2-3O型FMDV抗原表位重組質(zhì)粒圖譜

中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文第二章增強CHO細(xì)胞分泌表達O型FMDV抗原表位重組蛋白的信號肽篩選17pCI-neo載體雙酶切：雙酶切反應(yīng)體系，pCI-neo載體（5ug）10μL，10×Buffer5μL，NotI2μL，XhoI2μL，ddH2O31μL，總體積50μL。雙酶切反....

圖2-4信號肽切割位點的信息學(xué)分析

中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文第二章增強CHO細(xì)胞分泌表達O型FMDV抗原表位重組蛋白的信號肽篩選21圖2-4信號肽切割位點的信息學(xué)分析Fig.2-4InformaticsAnalysisofSignalPeptideCuttingSites2O-1：Erythropoietin信號....

本文編號：3964201