應用RT-PCR方法擴增鵝源星狀病毒(goose astrovirus,GoAstV)HLJ01株的ORF2基因,將擴增產(chǎn)物克隆至pET32a原核表達載體,并在大腸埃希菌BL21進行表達。通過SDS-PAGE分析表明,重組菌誘導后得到大小約為106 ku的ORF2蛋白,與理論值相符。將誘導表達的蛋白經(jīng)鎳親和層析柱純化后免疫小鼠制備多克隆抗體,并測定其抗體效價。Western-blotting結果顯示,ORF2蛋白可被鼠抗GoAstV陽性血清識別。序列分析表明,該毒株與其他鵝源星狀病毒參考毒株的核苷酸相似性介于37.8%～99.3%之間,HLJ-1801分離株與已發(fā)表的8株鵝源星狀病毒毒株位于同一分支,表明其屬于一種新型星狀病毒成員。利用原核表達系統(tǒng)成功高效地表達了GoAstV ORF2蛋白,融合蛋白以包涵體形式存在。本試驗成功獲得了純化的ORF2重組蛋白和小鼠抗GoAstV多克隆抗體,為進一步研究ORF2蛋白對星狀病毒感染的診斷試劑的研發(fā)奠定了基礎。

【文章頁數(shù)】：9 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 引物設計
        1.2.2 ORF2基因的擴增
        1.2.3 ORF2基因遺傳進化分析
        1.2.4 重組質粒pET32a-ORF2的構建
        1.2.5 ORF2蛋白的誘導表達及鑒定
        1.2.6 大腸埃希菌ORF2蛋白多克隆抗體制備
        1.2.7 多克隆抗體效價檢測及免疫原性鑒定
2 結果與分析
    2.1 ORF2基因擴增產(chǎn)物
    2.2 ORF2基因核苷酸與氨基酸序列相似性分析
    2.3 HLJ01株與參考毒株ORF2基因的遺傳進化樹分析
    2.4 HLJ01與參考毒株ORF2基因氨基酸序列比對
    2.5 重組表達載體pET32a-ORF2的雙酶切鑒定
    2.6 重組蛋白的SDS-PAGE分析
    2.7 Western Blot鑒定
    2.8 多克隆抗體的制備及檢測
3 討論



本文編號：3961908