荷斯坦奶牛(Holstein)是全世界乳牛的主要品種之一,也是目前生產(chǎn)每單位牛乳所需飼料費(fèi)最低的品種。乳腺干細(xì)胞與產(chǎn)奶量具有密切聯(lián)系,同時(shí)也是研究生物反應(yīng)器的重要材料。 為得到荷斯坦奶牛乳腺來(lái)源干細(xì)胞,本研究通過(guò)使用400UI/mL膠原酶、37℃環(huán)境下消化20h,得到乳腺細(xì)胞,再經(jīng)懸滴培養(yǎng)法篩選純化,后續(xù)貼壁培養(yǎng),獲得奶牛乳腺來(lái)源干細(xì)胞干細(xì)胞具有以下特性。 1.具有分化成其它類型細(xì)胞的能力,經(jīng)誘導(dǎo)培養(yǎng),該細(xì)胞分化為成骨細(xì)胞,茜素紅染色顯紅色鈣化骨結(jié)節(jié)。 2.自我增殖能力：在懸滴培養(yǎng)條件下能夠形成類似乳腺球結(jié)構(gòu)細(xì)胞團(tuán)。表達(dá)了干細(xì)胞標(biāo)記基因Nanog、Sox2、Oct4,以及乳腺干細(xì)胞參考標(biāo)記基因CD24、CD29、CD49f。 本研究得到的荷斯坦牛乳腺來(lái)源干細(xì)胞經(jīng)液氮凍存后復(fù)蘇仍具有較好的細(xì)胞活性；經(jīng)染色體數(shù)目分析,該細(xì)胞染色體為正常二倍體,表明在細(xì)胞具有較好的遺傳穩(wěn)定性。

【文章頁(yè)數(shù)】：49 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語(yǔ)表
1 前言
    1.1 乳腺的發(fā)育
    1.2 奶牛乳腺的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)
    1.3 乳腺干細(xì)胞特性
        1.3.1 乳腺干細(xì)胞的發(fā)現(xiàn)
        1.3.2 乳腺干細(xì)胞標(biāo)記研究
        1.3.3 乳腺干細(xì)胞的定位
        1.3.4 乳腺干細(xì)胞的增殖特性
        1.3.5 乳腺干細(xì)胞的分類
    1.4 乳腺干細(xì)胞分離培養(yǎng)
        1.4.1 流式細(xì)胞儀分離
        1.4.2 免疫磁珠法
        1.4.3 懸浮培養(yǎng)法
    1.5 乳腺干細(xì)胞發(fā)育微環(huán)境及相關(guān)信號(hào)通路
        1.5.1 乳腺干細(xì)胞微環(huán)境
        1.5.2 乳腺干細(xì)胞相關(guān)信號(hào)通路
    1.6 懸滴培養(yǎng)
    1.7 乳腺干細(xì)胞的研究意義及存在的問(wèn)題
        1.7.1 乳腺干細(xì)胞的研究意義
        1.7.2 乳腺干細(xì)胞研究中存在的問(wèn)題
    1.8 本研究的目的
2 乳腺來(lái)源干細(xì)胞的原代分離
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
    2.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑
    2.3 實(shí)驗(yàn)儀器及基本耗材
    2.4 試驗(yàn)方法
    2.5 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
3 乳腺來(lái)源干細(xì)胞的純化
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
    3.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑
    3.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器及耗材
    3.4 實(shí)驗(yàn)方法
    3.5 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
4 乳腺來(lái)源干細(xì)胞的擴(kuò)增培養(yǎng)
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
    4.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑
    4.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器及耗材
    4.4 實(shí)驗(yàn)方法
        4.4.1 乳腺來(lái)源干細(xì)胞的連續(xù)傳代
        4.4.2 乳腺來(lái)源干細(xì)胞生長(zhǎng)曲線的繪制
        4.4.3 乳腺來(lái)源干細(xì)胞的凍存與復(fù)蘇
        4.4.4 乳腺來(lái)源干細(xì)胞的核型分析
    4.5 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.5.1 乳腺來(lái)源干細(xì)胞的連續(xù)傳代
        4.5.2 乳腺來(lái)源干細(xì)胞生長(zhǎng)曲線的繪制
        4.5.3 乳腺來(lái)源干細(xì)胞的凍存與復(fù)蘇
        4.5.4 乳腺來(lái)源干細(xì)胞的核型分析
5 乳腺來(lái)源干細(xì)胞的初步鑒定
    5.1 實(shí)驗(yàn)材料
    5.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑
    5.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器及耗材
    5.4 實(shí)驗(yàn)方法
        5.4.1 乳腺來(lái)源干細(xì)胞乳腺球再形成實(shí)驗(yàn)
        5.4.2 乳腺來(lái)源干細(xì)胞成骨定向誘導(dǎo)分化
        5.4.3 乳腺來(lái)源干細(xì)胞誘導(dǎo)形成肌上皮細(xì)胞
        5.4.4 乳腺來(lái)源干細(xì)胞的分子鑒定
    5.5 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        5.5.1 乳腺來(lái)源干細(xì)胞乳腺球再形成實(shí)驗(yàn)
        5.5.2 乳腺來(lái)源干細(xì)胞成骨誘導(dǎo)
        5.5.3 乳腺來(lái)源干細(xì)胞誘導(dǎo)形成肌上皮細(xì)胞
        5.5.4 乳腺來(lái)源干細(xì)胞的分子鑒定
6 討論
    6.1 乳腺來(lái)源干細(xì)胞的原代分離
    6.2 乳腺來(lái)源干細(xì)胞的純化
    6.3 乳腺來(lái)源干細(xì)胞的初步鑒定
7 全文結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3958985