為獲得傳染性法氏囊病病毒(IBDV)特異性抗體檢測用抗原VP2、VP1及VP2-VP1蛋白,分別設(shè)計引物擴(kuò)增IBDV野毒株NN1172的VP2和VP1基因,并擴(kuò)增VP2和VP1基因中抗原性和親水性較好的重要區(qū)域,通過PCR擴(kuò)增基因串聯(lián)方法對截短的VP2和截短的VP1基因進(jìn)行串聯(lián),首次獲得VP2-VP1串聯(lián)基因,并對VP2、VP1和VP2-VP1串聯(lián)基因進(jìn)行了原核表達(dá)和鑒定。結(jié)果成功構(gòu)建了原核表達(dá)載體pET-VP2、pET-VP1和pET-VP2-VP1;誘導(dǎo)表達(dá)條件顯示,3個重組質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)入BL21菌株后經(jīng)0.05 mmol/L IPTG誘導(dǎo)表達(dá),分別得到分子量為69、114和63 kDa的VP2、VP1和VP2-VP1重組蛋白,且均以包涵體形式表達(dá),3個重組蛋白分別于誘導(dǎo)后5、3和6 h時表達(dá)量最多。Western blot結(jié)果顯示,表達(dá)的VP2、VP1和VP2-VP1蛋白與雞抗IBDV陽性血清均具有良好的反應(yīng)原性。以純化的VP2、VP1和VP2-VP1蛋白作為包被抗原對傳染性支氣管炎病毒(IBV)、呼腸孤病毒(ReoV)、禽白血病病毒(ALV)和新城疫病毒(NDV)4種陽性血清檢測...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 病毒、菌株及IBDV陽性血清
    1.2 主要試劑
    1.3 引物的設(shè)計與合成
    1.4 重組表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建
        1.4.1 IBDV VP2、VP1和VP2-VP1串聯(lián)基因的擴(kuò)增
        1.4.2 重組表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建與鑒定
    1.5 VP2、VP1和VP2-VP1串聯(lián)基因的誘導(dǎo)表達(dá)
        1.5.1 誘導(dǎo)表達(dá)及其條件的優(yōu)化
        1.5.2 分析重組蛋白表達(dá)形式
    1.6 純化重組蛋白
    1.7 表達(dá)蛋白的Western blot分析
    1.8 表達(dá)蛋白的特異性及其臨床初步應(yīng)用
2 結(jié)果
    2.1 重組表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建及鑒定
    2.2 誘導(dǎo)表達(dá)條件的優(yōu)化
    2.3 表達(dá)蛋白的可溶性分析
    2.4 重組表達(dá)蛋白的純化
    2.5 表達(dá)蛋白Western blot鑒定結(jié)果
    2.6 表達(dá)蛋白的臨床初步應(yīng)用分析
3 討論



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