發(fā)布時(shí)間：2024-04-11 23:27

　　豬圓環(huán)病毒2型(porcine circovirus type 2, PCV2)是引起豬圓環(huán)病毒相關(guān)疾病(porcine circovirus associated disease, PCVAD)的主要病原,是重要的免疫抑制性疾病,給世界養(yǎng)豬業(yè)帶來了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。豬圓環(huán)病毒2型單獨(dú)感染并不能引起典型的臨床癥狀,當(dāng)與其它病原體混合感染時(shí)能促進(jìn)疾病的發(fā)生。豬圓環(huán)病毒2型與豬細(xì)小病毒有共同的靶細(xì)胞,其混合感染的發(fā)病機(jī)制仍不清楚,鑒于豬圓環(huán)病毒2型與豬細(xì)小病毒混合感染是模擬斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合癥(Postweaning Multisystemic Wasting Syndrome, PMWS)的典型發(fā)病模型。本研究擬通過檢測豬圓環(huán)病毒2型與豬細(xì)小病毒體外混合感染不同細(xì)胞細(xì)胞因子水平變化,對(duì)其混合感染的機(jī)制進(jìn)行初步探討。1. PCV2, PPV, IFN-γ,TNF-α, IL-10, β-actin real-time PCR檢測方法的建立本研究根據(jù)GenBank中PCV2, PPV,豬IFN-y,豬TNF-a,豬IL-10, β-actin基因序列設(shè)計(jì)引物,用RT-PCR擴(kuò)增豬肺泡巨噬細(xì)...

【文章頁數(shù)】：90 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
英文縮略詞表
第一部分 文獻(xiàn)綜述
    第一章 豬圓環(huán)病毒2型的國內(nèi)外研究進(jìn)展
        1 豬圓環(huán)病毒2型概述
            1.1 病原學(xué)
            1.2 豬圓環(huán)病毒的基因結(jié)構(gòu)及編碼蛋白
            1.3 病毒編碼的蛋白
            1.4 流行病學(xué)
        2 病毒與宿主免疫系統(tǒng)的相互作用
            2.1 免疫細(xì)胞的感染
            2.2 IL-10等細(xì)胞因子在PCV2發(fā)病機(jī)制中的作用
            2.3 病毒和宿主蛋白之間的作用
            2.4 病毒DNA和宿主蛋白之間的相互作用
        3 豬圓環(huán)病毒2型的致病機(jī)制
            3.1 淋巴細(xì)胞缺失和免疫抑制
            3.2 PCV2感染和細(xì)胞凋亡
            3.3 PCV2病毒毒力
            3.4 遺傳易感性
            3.5 PCVAD相關(guān)的免疫增強(qiáng)作用
        4 保護(hù)性免疫
            4.1 疫苗與免疫
            4.2 中和抗體和細(xì)胞免疫在保護(hù)中的作用
        5 PCVAD的防治
        6 總結(jié)和未來展望
        參考文獻(xiàn)
    第二章 豬細(xì)小病毒及與豬圓環(huán)病毒混合感染的研究進(jìn)展
        1 病原學(xué)
        2 流行病學(xué)及致病機(jī)制
            2.1 流行病學(xué)
            2.2 致病機(jī)理
        3 PCV2與PPV混合感染的研究進(jìn)展
        參考文獻(xiàn)
第二部分 實(shí)驗(yàn)研究
    第三章 PCV-2,PPV IFN-γ,TNF-α,IL-10和β-actin部分基因片段real-time PCR檢測方法的建立
        摘要
        1 材料
            1.1 毒株、細(xì)胞株和菌株
            1.2 載體
            1.3 主要試劑
            1.4 主要儀器
        2 方法
            2.1 PCV2病毒的增殖及TCID₅₀的測定
            2.2 PPV病毒的增殖及TCID₅₀的測定
            2.3 基因組的提取
            2.4 引物的設(shè)計(jì)與合成
            2.5 目的基因的擴(kuò)增
            2.6 PCV2、PPV及細(xì)胞因子重組克隆質(zhì)粒的構(gòu)建
            2.7 real-time PCR方法的建立
            2.8 real-time PCR反應(yīng)條件的優(yōu)化
            2.9 real-time PCR方法學(xué)評(píng)價(jià)
        3 結(jié)果
            3.1 PCV2、PPV及豬細(xì)胞因子目的基因的擴(kuò)增
            3.2 重組質(zhì)粒的雙酶切鑒定
            3.3 重組質(zhì)粒濃度的計(jì)算
            3.4 反應(yīng)條件的優(yōu)化
            3.5 real-time PCR方法學(xué)評(píng)價(jià)
        4 討論
        參考文獻(xiàn)
        ABSTRACT
    第四章 PCV2與PPV混合感染對(duì)原代PAM的影響
        摘要
        1 材料
            1.1 病毒與細(xì)胞
            1.2 主要試劑
            1.3 主要儀器
            1.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2 方法
            2.1 肺泡巨噬細(xì)胞(PAM)的分離
            2.2 PCV2和PPV混合感染肺泡巨噬細(xì)胞實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
            2.3 PCV2和PPV在肺泡巨噬細(xì)胞中病毒核酸拷貝數(shù)的檢測
            2.4 PCV2和PPV混合感染PAM后PCV2 IFA檢測
            2.5 細(xì)胞因子IFN-γ,TNF-α,IL-10和β-actin mRNA的real-time PCR檢測
            2.6 數(shù)據(jù)分析
        3 結(jié)果與分析
            3.1 病毒感染PAM后病毒核酸拷貝數(shù)的變化
            3.2 病毒感染PAM后PCV2 IFA檢測
            3.3 病毒感染PAM后細(xì)胞因子表達(dá)水平的變化
        4 討論
        參考文獻(xiàn)
        ABSTRACT
    第五章 PCV2與PPV混合感染對(duì)3D4/21細(xì)胞的影響
        摘要
        1 材料
            1.1 病毒與細(xì)胞
            1.2 主要試劑
            1.3 主要儀器
        2 方法
            2.1 PCV2和PPV混合感染3D4/21細(xì)胞實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
            2.2 PCV2和PPV在3D4/21細(xì)胞中病毒核酸拷貝數(shù)的檢測
            2.3 PCV2和PPV混合感染PAM后PCV2IFA檢測
            2.4 細(xì)胞因子TNF-α,IFN-γ,IL-10和β-actin mRNA的real-time PCR檢測
            2.5 數(shù)據(jù)分析
        3 結(jié)果與分析
            3.1 病毒感染3D4/21細(xì)胞后病毒核酸拷貝數(shù)的動(dòng)態(tài)變化
            3.2 病毒感染3D4/21后PCV2 IFA檢測
            3.3 病毒感染3D4/21后細(xì)胞因子表達(dá)水平的變化
        4 討論
        參考文獻(xiàn)
        ABSTRACT
全文總結(jié)
致謝



本文編號(hào)：3951308