山羊多能性干細胞包括：山羊胚胎干細胞(Embryonic Stem Cell, ESCs),山羊胚胎生殖細胞(Embryonic Germ Cell, EGCs)和山羊誘導性多能干細胞(Induced Pluripotent Stem cells, iPSc)。由于對山羊體外的培養(yǎng)體系和表觀調(diào)控因素仍然不清楚,導致山羊ESCs和EGCs的研究仍沒有成功建系的報道。而iPS細胞技術(shù)的出現(xiàn),為家畜多能性細胞研究提供了新的途徑和可替代的細胞來源。本實驗以關(guān)中奶山羊為實驗模型,通過從體內(nèi)受精和發(fā)育的囊胚中分離出多能性細胞,嘗試篩選適合山羊多能性細胞在體外培養(yǎng)的條件；另外,本實驗采用山羊胎兒成纖維細胞(Goat Embryonic Fibroblasts, GEF)為供體細胞,通過逆轉(zhuǎn)錄病毒攜帶的Oct4/Sox2/Klf4/c-Myc四個轉(zhuǎn)錄因子,對山羊體細胞進行誘導重編程,并且將誘導重編程細胞定向轉(zhuǎn)分化為神經(jīng)樣細胞和卵母細胞樣細胞。 主要獲得以下結(jié)論： 1.山羊多能性細胞培養(yǎng)體系的優(yōu)化 本實驗共超排處理了25只關(guān)中奶山羊,總共獲得胚胎253枚,其中發(fā)育到2-16細胞的胚胎39枚、桑椹胚113...

【文章頁數(shù)】：81 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
文獻綜述
    第一章 動物多能干細胞的研究
        1.1 動物胚胎干細胞研究
            1.1.1 小鼠胚胎干細胞的研究
            1.1.2 人類胚胎干細胞的研究
            1.1.3 家畜胚胎干細胞的研究
        1.2 誘導多能性干細胞的研究
            1.2.1 多能性轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子
            1.2.2 受體細胞的選擇
            1.2.3 誘導細胞重編程的方法
            1.2.4 多能性細胞的鑒定
        1.3 多能干細胞應用前景
            1.3.1 再生醫(yī)學與藥物篩選
            1.3.2 發(fā)育與基因表觀遺傳調(diào)控
            1.3.3 動物轉(zhuǎn)基因克隆與育種
    第二章 體細胞的轉(zhuǎn)分化研究
        2.1 轉(zhuǎn)分化的研究進展
        2.2 轉(zhuǎn)分化的分類
            2.2.1 成體干細胞轉(zhuǎn)分化
            2.2.2 體細胞轉(zhuǎn)分化
        2.3 體細胞轉(zhuǎn)分化的應用前景
試驗研究
    第三章 山羊多能干細胞培養(yǎng)條件的篩選與鑒定
        3.1 材料與方法
            3.1.1 實驗材料
            3.1.2 實驗方法
        3.2 結(jié)果
            3.2.1 山羊體內(nèi)胚胎的獲取
            3.2.2 山羊多能干細胞的分離
            3.2.3 培養(yǎng)條件對山羊ICM貼壁和多能性細胞培養(yǎng)的影響
            3.2.4 培養(yǎng)基對山羊多能性細胞分離的影響
            3.2.5 小分子化合物對山羊多能性細胞分離和培養(yǎng)的影響
            3.2.6 傳代方法對山羊多能性細胞培養(yǎng)的影響
            3.2.7 山羊多能性細胞的鑒定
        3.3 討論
        3.4 小結(jié)
    第四章 誘導山羊體細胞重編程及其鑒定
        4.1 材料和方法
            4.1.1 試驗材料
            4.1.2 試驗方法
        4.2 結(jié)果
            4.2.1 山羊體細胞的分離與培養(yǎng)
            4.2.2 山羊成纖維細胞(GEF)生長曲線
            4.2.3 山羊GEF細胞的誘導重編程
            4.2.4 逆轉(zhuǎn)錄病毒感染效率的測定
            4.2.5 對山羊誘導多能性細胞進行鑒定
        4.3 討論
        4.4 小結(jié)
    第五章 山羊體細胞定向轉(zhuǎn)分化研究
        5.1 材料和方法
            5.1.1 試驗材料
            5.1.2 試驗方法
        5.2 結(jié)果
            5.2.1 對重編程不同時間成纖維細胞特異基因表達的檢測
            5.2.2 體細胞轉(zhuǎn)分化為神經(jīng)樣細胞
            5.2.3 對轉(zhuǎn)分化的神經(jīng)樣細胞進行免疫熒光檢測
            5.2.4 體細胞轉(zhuǎn)分化為卵母細胞樣細胞
            5.2.5 對轉(zhuǎn)分化的卵母細胞樣細胞進行核染色
            5.2.6 對獲得的卵母細胞樣細胞進行顯微操作
        5.3 討論
        5.4 小結(jié)
結(jié)論
創(chuàng)新點與進一步研究的課題
參考文獻
縮略詞
致謝
作者簡介



本文編號：3951403