本研究旨在對(duì)類NADC30毒株進(jìn)行病毒分離和全基因組測序,了解類NADC30毒株的分子特征和遺傳進(jìn)化情況,對(duì)類NADC30毒株進(jìn)行深入的研究。同時(shí)對(duì)河南及周邊地區(qū)流行的PRRSV毒株的ORF5及nsp2的基因變異情況進(jìn)行檢測,揭示PRRSV毒株的最新流行動(dòng)態(tài),以期為臨床診斷、新疫苗的研發(fā)及抗病毒藥物的研發(fā)提供科學(xué)的參考依據(jù)。一、PRRSV分型PCR方法的建立為了更快捷準(zhǔn)確地對(duì)類NADC30毒株進(jìn)行檢測,本實(shí)驗(yàn)針對(duì)PRRSV類NADC30毒株、HP-PRRSV毒株、經(jīng)典PRRSV毒株在nsp2區(qū)域分別缺失131個(gè)氨基酸、30個(gè)氨基酸無缺失這一分子特征,設(shè)計(jì)一對(duì)引物建立PCR方法對(duì)這3類毒株進(jìn)行分型。本實(shí)驗(yàn)完成該RT-PCR方法的建立,及敏感性和特異性的驗(yàn)證,并對(duì)臨床樣品進(jìn)行檢測。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明:該方法能夠同時(shí)將經(jīng)典PRRSV毒株、HP-PRRSV毒株以及類NADC30毒株這三種類型的毒株進(jìn)行區(qū)分,并具有良好的敏感性和特異性。二、對(duì)2016-2017年河南省及周邊地區(qū)的PRRSV的分子檢測,及ORF5、nsp2基因的變異分析本研究對(duì)756份臨床樣品進(jìn)行RT-PCR檢測,共檢出陽性樣品139份...

【文章頁數(shù)】：79 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖1-1PRRSV粒子示意圖

內(nèi)部含有病毒核酸[17]。病毒粒子在pH6.5或大于pH7.5的條件下則會(huì)喪失感染力[18-19]。PRRS敏感，在56℃放置45min或者37℃條件下放置48h長期保存，可在-70℃保存一年左右，并表現(xiàn)出良好對(duì)乙醚和氯仿等脂溶劑比較敏感，其在氯化銫和蔗糖.14....

圖1-2PRRSV的基因組結(jié)構(gòu)

亞基因組mRNAs來進(jìn)行的。ORF2a、ORF2b、ORF3、ORF4、ORF5、ORF5、ORF6、ORF7依次編碼病毒的結(jié)構(gòu)蛋白GP2a、E、GP3、GP4、GP5、GP5a、M、N。GP2-GP5是PRRSV的糖基化結(jié)構(gòu)蛋白，M和N是病毒的非糖基化結(jié)構(gòu)蛋白，....

圖2-1RT-PCR檢測結(jié)果

類NADC30毒株HNjz15、VR2332株、JXA1株的后進(jìn)行10倍系列稀釋后PCR擴(kuò)增，檢測其敏感性NADC30、HP-PRRSV和經(jīng)典毒株的RT-PCR臨床陽性樣品通過設(shè)計(jì)的引物進(jìn)行PRRSV分型檢測，并行比對(duì)，驗(yàn)證該引物是否可用于臨床樣品檢....

圖2-2RT-PCR鑒別檢測方法的特異性試驗(yàn)結(jié)果??

CR產(chǎn)物經(jīng)過切膠、回收、連接轉(zhuǎn)化、挑菌鑒定之后送金唯智公R2332分別能擴(kuò)增出681bp、984bp、1074bp的片段，測序的結(jié)致，說明擴(kuò)增的結(jié)果與對(duì)應(yīng)的毒株相吻合。別檢測方法的特異性實(shí)驗(yàn)結(jié)果對(duì)PRRSVVR2332株、JXA1株、HNjz15株以及PEDV....

本文編號(hào)：3935530