犬細(xì)小病毒病是對寵物臨床上危害較大的傳染病之一,我國徐漢坤在1983年首次報道了犬細(xì)小病毒病,雖然該病出現(xiàn)至今只有30年時間,但是該病發(fā)病比較急、死亡率比較高,給養(yǎng)犬業(yè)帶來了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。 CPV是單鏈DNA病毒,但變異速率與RNA病毒相當(dāng),目前已經(jīng)出現(xiàn)了三個亞型,即CPV-2a、CPV-2b、CPV-2c。根據(jù)臨床癥狀表現(xiàn)主要分為腸炎型和心肌炎型兩種類型。但現(xiàn)在心肌炎型很少見,以腸炎型為主。臨床上寵物醫(yī)院對該病的診斷主要使用進(jìn)口的膠體金試紙條,成本比較高。本研究旨在建立一種犬細(xì)小病毒乳膠凝集快速檢測方法,為寵物臨床提供一種快速、簡單、便宜的檢測方法。 本研究運(yùn)用本實(shí)驗室制備的抗CPV-2b亞型單克隆抗體,致敏羧化乳膠顆粒,用單抗致敏乳膠,摸索偶聯(lián)的最佳條件,包括致敏的抗體量和致敏時間等。乳膠檢測試劑自身穩(wěn)定、特異性好、敏感度高,最終建立了一種犬細(xì)小病毒乳膠凝集檢測試劑和檢測方法,并對臨床樣品進(jìn)行了檢測。 在武漢市的寵物醫(yī)院采集了病料150份,其中有91份病料接種F81細(xì)胞,提取DNA模板,PCR擴(kuò)增583bp的片段,經(jīng)測序后結(jié)果顯示有72份是CPV-2a亞型(79.1%),9份是C...

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略語表(Abbreviation)
第1章 文獻(xiàn)綜述
    引言
    1.1 CPV的病原學(xué)
    1.2 CPV的流行情況
        1.2.1 CPV的分子流行情況
        1.2.2 CPV的流行特點(diǎn)
    1.3 犬細(xì)小病毒病的臨床癥狀
    1.4 CPV的感染機(jī)制
    1.5 CPV的診斷
        1.5.1 病毒分離(Ⅵ)
        1.5.2 血凝試驗(HA)
        1.5.3 酶聯(lián)免疫吸附反應(yīng)(ELISA)
        1.5.4 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)
        1.5.5 膠體金檢測方法
        1.5.6 乳膠凝集試驗檢測方法(LAT)
    1.6 CPV的預(yù)防與治療
        1.6.1 CPV的預(yù)防
        1.6.2 CPV的治療
    1.7 本研究的目的和意義
第2章 材料與方法
    2.1 試驗材料
        2.1.1 細(xì)胞、病料、菌種、載體、抗體
        2.1.2 相關(guān)試劑及耗材
        2.1.3 主要試劑及溶液的配置
        2.1.4 試驗器材
        2.1.5 本研究所用寡核苷酸引物
    2.2 試驗方法
        2.2.1 乳膠顆粒致敏
        2.2.2 犬細(xì)小病毒乳膠凝集檢測方法的操作步驟和結(jié)果判定
        2.2.3 抗體與乳膠偶聯(lián)條件的優(yōu)化
        2.2.4 犬細(xì)小病毒乳膠凝集檢測試劑的敏感性和特異性
        2.2.5 犬細(xì)小病毒乳膠凝集檢測試劑的重復(fù)性試驗
        2.2.6 犬細(xì)小病毒乳膠凝集檢測試劑的保存期試驗
        2.2.7 犬細(xì)小病毒病料的采集及流行病學(xué)調(diào)查
        2.2.8 犬細(xì)小病毒乳膠凝集與膠體金試紙條和PCR檢測方法的比較
第3章 結(jié)果與分析
    3.1 抗體與乳膠偶聯(lián)條件的優(yōu)化
        3.1.1 最佳偶聯(lián)抗體量的確定
        3.1.2 最佳偶聯(lián)時間的確定
    3.2 犬細(xì)小病毒乳膠凝集檢測試劑的敏感性和特異性
        3.2.1 敏感性試驗
        3.2.2 特異性試驗
    3.3 犬細(xì)小病毒乳膠凝集檢測試劑的重復(fù)性試驗
        3.3.1 批內(nèi)重復(fù)性試驗
        3.3.2 批間重復(fù)性試驗
    3.4 犬細(xì)小病毒乳膠凝集檢測試劑的保存期試驗
    3.5 犬細(xì)小病料的采集和流行病學(xué)
        3.5.1 病料的采集
        3.5.2 華中地區(qū)犬細(xì)小病毒的流行病學(xué)
    3.6 CPV乳膠凝集與膠體金試紙條及PCR檢測方法的比較
第4章 討論與結(jié)論
    4.1 討論
        4.1.1 CPV流行病學(xué)
        4.1.2 CPV乳膠凝集檢測方法的研究
    4.2 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
碩士期間進(jìn)行的其他工作
    摘要
    引言
    1. 材料與方法
        1.1 試驗材料
            1.1.1 病毒、菌種、細(xì)胞、質(zhì)粒
            1.1.2 相關(guān)試劑及耗材
            1.1.3 主要試劑及溶液的配置
            1.1.4 本研究所用寡核苷酸引物
        1.2 試驗方法
            1.2.1 轉(zhuǎn)移質(zhì)粒的構(gòu)建
            1.2.2 重組病毒的構(gòu)建
            1.2.3 一步法增殖曲線
            1.2.4 空斑大小的比較
            1.2.5 UL0.7的克隆與原核表達(dá)
            1.2.6 UL0.7兔多抗的制備
    2. 結(jié)果與分析
        2.1 UL0.7基因的生物信息學(xué)預(yù)測
        2.2 重組病毒的構(gòu)建與鑒定
            2.2.1 BHV-5ΔUL0.7/EGFP⁺重組病毒的構(gòu)建
            2.2.2 BHV-5ΔUL0.7/EGFP⁺重組病毒PCR鑒定
        2.3 重組病毒PFU的測定
        2.4 空斑大小的比較
        2.5 一步生長曲線的繪制
        2.6 UL0.7兔多抗的檢測
    3. 討論與結(jié)論
        3.1 討論
        3.2 結(jié)論
    參考文獻(xiàn)
附錄
致謝



本文編號：3934982