研究目的:雞盲腸上皮細(xì)胞是柔嫩艾美耳球蟲(E.tenella)的宿主細(xì)胞,通過探索和優(yōu)化雞胚盲腸上皮細(xì)胞傳代條件,以期建立雞胚盲腸上皮細(xì)胞系為E.tenella對機(jī)體的損傷機(jī)制及抗球蟲藥的研究提供體外細(xì)胞模型。材料與方法:本試驗(yàn)通過對雞胚盲腸上皮原代細(xì)胞分離消化酶的篩選、不同日齡雞胚的選擇、傳代消化酶和營養(yǎng)因素的篩選,對連續(xù)傳10以內(nèi)代的細(xì)胞采用MTT法測定細(xì)胞活力,運(yùn)用免疫組化染色、光鏡、電鏡及染色體核型分析等方法鑒定培養(yǎng)盲腸上皮細(xì)胞的純度和特性。結(jié)果:(1)嗜熱菌蛋白酶組(T組)、I型膠原酶(C組)、I型膠原酶+透明質(zhì)酸酶組(H組)的雞胚盲腸上皮第三代細(xì)胞增殖率依次降低;T組細(xì)胞貼壁率除第1天外其他時間段均極顯著(P<0.01)高于C組、H組;細(xì)胞活力第1天至5天極顯著(P<0.01)高于C組,各時間段均極顯著(P<0.01)高于H組。(2)14日齡雞胚(T14組)、15日齡雞胚(T15組)、16日齡雞胚(T16組)、17日齡雞胚(T17組)盲腸上皮細(xì)胞增殖率依次為由高到低;T14組與T15組細(xì)胞貼壁率除第2天和8天外其他不同時間段均顯著高于(P<0.05)...

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圖３－１不同傳代消化酶對傳代細(xì)胞貼壁率影響??

代盲腸上皮細(xì)胞接種后有大量細(xì)胞貼壁附著并開始增殖；使用０．２５％胰酶－０．０２％ＥＤＴＡ??先處理細(xì)胞３０ｓ后棄去再加入０．２５％胰酶－０．０２％ＥＤＴＡ?（Ｔ５組）處理ｌｍｉｎ?２０ｓ得到的細(xì)??胞結(jié)果同Ｔ４組，但貼壁率和增殖率極顯著（Ｐ＜０．０１）低于Ｔ４組，詳見表７、圖３－....

圖３－２不同傳代消化酶對其代細(xì)胞貼壁率影響??－

代盲腸上皮細(xì)胞接種后有大量細(xì)胞貼壁附著并開始增殖；使用０．２５％胰酶－０．０２％ＥＤＴＡ??先處理細(xì)胞３０ｓ后棄去再加入０．２５％胰酶－０．０２％ＥＤＴＡ?（Ｔ５組）處理ｌｍｉｎ?２０ｓ得到的細(xì)??胞結(jié)果同Ｔ４組，但貼壁率和增殖率極顯著（Ｐ＜０．０１）低于Ｔ４組，詳見表７、圖３－....

圖５－３培養(yǎng)６０ｈ的原代雞胚盲腸上皮細(xì)胞呈鋪路石?

５．１形態(tài)學(xué)觀察??培養(yǎng)６０ｈ的原代雞胚盲腸上皮細(xì)胞大多數(shù)呈多角形或短梭形，細(xì)胞核呈圓形或橢圓形，一??般有２＾４枚核仁（圖５－１、圖５－２）。細(xì)胞之間緊密相連，連接成片，呈“鋪路石”樣（圖５－３、??圖５－４），多數(shù)細(xì)胞呈島嶼狀聚集（圖５－５），部分細(xì)胞散在分布（圖５－６）。?....

圖５－４培養(yǎng)６０ｈ的原代雞胚盲腸上皮細(xì)胞呈鋪路石??樣生長?樣生長，ＨＥ??－－＊

５．１形態(tài)學(xué)觀察??培養(yǎng)６０ｈ的原代雞胚盲腸上皮細(xì)胞大多數(shù)呈多角形或短梭形，細(xì)胞核呈圓形或橢圓形，一??般有２＾４枚核仁（圖５－１、圖５－２）。細(xì)胞之間緊密相連，連接成片，呈“鋪路石”樣（圖５－３、??圖５－４），多數(shù)細(xì)胞呈島嶼狀聚集（圖５－５），部分細(xì)胞散在分布（圖５－６）。?....

本文編號：3924092