恒河猴幼猴B病毒動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)和BV-gD真核表達(dá)與應(yīng)用研究
發(fā)布時(shí)間:2024-03-08 21:15
猴B病毒(Cercopithecine herpesvirus1, Herpesvirus simiae, monkey B virus; BV),屬于α-皰疹病毒,主要存在于亞洲尤其是印度系獼猴屬(如恒河猴和食蟹猴等)動(dòng)物中,是一種嚴(yán)重危害人類健康的動(dòng)物源性病原體,屬于第一類病原微生物。在自然宿主獼猴中的感染率相當(dāng)高,多呈潛伏感染,常見口、生殖器皰疹或呈無癥狀感染,類似于人單純皰疹病毒Ⅰ型(Herpes simple virus, HSV Ⅰ)和Ⅱ型(HSV Ⅱ)感染患者的臨床表現(xiàn)。病毒可長(zhǎng)期潛伏在機(jī)體的三叉神經(jīng)節(jié)和腰骶神經(jīng)節(jié),不定期活化,通過唾液或生殖道向外排毒。獼猴之間的病毒一般通過交配、咬傷或者抓傷等方式傳播,母猴垂直傳播給仔猴幾率極低。人感染后則會(huì)導(dǎo)致腦炎、腦脊髓炎,嚴(yán)重的呼吸麻痹死亡,在未及時(shí)得到藥物治療的情況下病死率超過70%,幸存者會(huì)留下神經(jīng)后遺癥。猴B病毒的疫苗類制劑尚未成型且無有效的抗病毒藥物,快速檢測(cè)和早期診斷是防止病毒危害的主要措施之一。 B病毒的檢測(cè)方法主要包括病原分離、分子生物學(xué)及血清學(xué)檢測(cè)法。病毒分離是標(biāo)準(zhǔn)的檢測(cè)方法,但由于B病毒操作的危險(xiǎn)性、分離培養(yǎng)耗時(shí)...
【文章頁數(shù)】:53 頁
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【文章目錄】:
中文摘要
Abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
1 B病毒的分子生物學(xué)特征
2 B病毒的感染
2.1 自然宿主BV感染
2.2 人BV感染
3 B病毒的檢測(cè)
3.1 病毒分離培養(yǎng)
3.2 分子生物學(xué)方法
3.3 血清學(xué)檢測(cè)方法
4 BV疾病的預(yù)防和治療
5 SPF猴群的建立和維護(hù)
第二章 恒河猴離乳幼猴B病毒動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)
1 實(shí)驗(yàn)材料
1.1 動(dòng)物及血清
1.2 儀器設(shè)備
1.3 試劑
2 實(shí)驗(yàn)方法
2.1 酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)
2.2 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
3.1 A組15只群養(yǎng)恒河猴幼猴
3.2 B組(B1和B2)39只群養(yǎng)恒河猴幼猴
4 分析與討論
第三章 猴B病毒囊膜糖蛋白gD 293T細(xì)胞中的表達(dá)及應(yīng)用的研究
1 實(shí)驗(yàn)材料
1.1 動(dòng)物
1.2 細(xì)胞和載體
1.3 儀器設(shè)備
1.4 試劑
2 實(shí)驗(yàn)方法
2.1 真核表達(dá)載體pcDNA3.1-6×his-gD的構(gòu)建
2.2 重組質(zhì)粒提取
2.3 pcDNA3.1-6×his-gD雙酶切鑒定
2.4 293t細(xì)胞的培養(yǎng)及傳代
2.5 轉(zhuǎn)染293t細(xì)胞
2.6 gD蛋白質(zhì)的純化
2.7 SDS-PAGE和western blot檢測(cè)
2.8 gD濃度測(cè)定及恒河猴免疫
3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
3.1 重組質(zhì)粒pcDNA3.1-6×his-gD的雙酶切鑒定及測(cè)序
3.2 gD蛋白在293T細(xì)胞中的表達(dá)及純化
3.3 免疫動(dòng)物血清抗體效價(jià)的ELISA檢測(cè)
4 分析與討論
5 總結(jié)
縮略詞
參考文獻(xiàn)
致謝
本文編號(hào):3922401
【文章頁數(shù)】:53 頁
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【文章目錄】:
中文摘要
Abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
1 B病毒的分子生物學(xué)特征
2 B病毒的感染
2.1 自然宿主BV感染
2.2 人BV感染
3 B病毒的檢測(cè)
3.1 病毒分離培養(yǎng)
3.2 分子生物學(xué)方法
3.3 血清學(xué)檢測(cè)方法
4 BV疾病的預(yù)防和治療
5 SPF猴群的建立和維護(hù)
第二章 恒河猴離乳幼猴B病毒動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)
1 實(shí)驗(yàn)材料
1.1 動(dòng)物及血清
1.2 儀器設(shè)備
1.3 試劑
2 實(shí)驗(yàn)方法
2.1 酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)
2.2 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
3.1 A組15只群養(yǎng)恒河猴幼猴
3.2 B組(B1和B2)39只群養(yǎng)恒河猴幼猴
4 分析與討論
第三章 猴B病毒囊膜糖蛋白gD 293T細(xì)胞中的表達(dá)及應(yīng)用的研究
1 實(shí)驗(yàn)材料
1.1 動(dòng)物
1.2 細(xì)胞和載體
1.3 儀器設(shè)備
1.4 試劑
2 實(shí)驗(yàn)方法
2.1 真核表達(dá)載體pcDNA3.1-6×his-gD的構(gòu)建
2.2 重組質(zhì)粒提取
2.3 pcDNA3.1-6×his-gD雙酶切鑒定
2.4 293t細(xì)胞的培養(yǎng)及傳代
2.5 轉(zhuǎn)染293t細(xì)胞
2.6 gD蛋白質(zhì)的純化
2.7 SDS-PAGE和western blot檢測(cè)
2.8 gD濃度測(cè)定及恒河猴免疫
3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
3.1 重組質(zhì)粒pcDNA3.1-6×his-gD的雙酶切鑒定及測(cè)序
3.2 gD蛋白在293T細(xì)胞中的表達(dá)及純化
3.3 免疫動(dòng)物血清抗體效價(jià)的ELISA檢測(cè)
4 分析與討論
5 總結(jié)
縮略詞
參考文獻(xiàn)
致謝
本文編號(hào):3922401
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